微生物限度检查方法学验证报告模板.docVIP

PAGE 第 page 7页 共 numpages 7页 微生物限度检查法验证试验报告 品 名 奥氮平盐酸氟西汀胶囊 规 格 12mg/25mg 批 号20140808来 源 试验日期 2014年8月24日～2014年9月20日 依 据 《中国药典》2010版二部 1、样品：奥氮平盐酸氟西汀胶囊（批20140808，规格：12mg/25mg 2、试液与稀释液： pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（批号：）、0.9%无菌氯化钠（批号：）、1%红四氮唑（批号：）、含1%聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（批号：）。 3、主要的设备及器具： 净化工作台（型号）、培养箱（型号）、 电子天平（型号）、恒温摇床（型号）、生物安全柜（型号）、无菌培养皿、菌落计数器、接种环、、酒精棉球、酒精灯、刻度吸管 （1ml，10ml）、锥形瓶、试管及试管塞、吸耳球、显微镜等。 4、验证试验用菌种： 大肠埃希菌CMCC(B)44 102、枯草芽孢杆菌CMCC(B)63 501、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26 003、白色念珠菌CMCC(F)98 001、黑曲菌CMCC(F)98 003，均由中国药品生物制品鉴定所提供。 5、对照培养基： 4-甲基伞形酮葡萄苷酸（MUG）培养基（批号），胆盐乳糖发酵培养基（批号），胆盐乳糖培养基（批号）；玫瑰红钠琼脂（批号）；营养琼脂（批号），营养肉汤培养基（批号），均由中国食品药品检定研究院提供。 6、试验用培养基： 营养琼脂培养基（批号）；玫瑰红钠琼脂培养基（批号）；营养肉汤培养基（批号）；改良马丁培养基（批号），胆盐乳糖培养基（批号）；4-甲基伞形酮葡萄苷酸(MUG)培养基（批号），由******公司提供（配制）。 7、试验方案 按《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ J微生物限度检查法规定，本品微生物限度标准应为：1g供试品中，细菌数不得过1000cfu，霉菌和酵母菌数不得过100cfu，大肠埃希菌不得检出。 7.1 验证试验的目的 对所采用的方法进行验证，确认该方法适用于本品的微生物限度检查，即确认本品在该检验量及检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除至可忽略不计，以确保检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。 7.2 微生物限度检查方法草案 微生物限度 取样品10g，加含1%聚山梨酯80的pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液定溶至100ml，振摇至供试品分散均匀，制成1:10的供试液。取1：10的供试液1ml，置含1%聚山梨酯80的pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液9ml，即为1:100的供试液，取1:100的供试液1ml，置含1%聚山梨酯80的pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液9ml，即为1:1000的供试液。细菌计数，取1:100的供试液1ml，等量分注于5个平皿中，每个平皿0.2ml，依法检查（中国药典2010年版二部附录Ⅺ J）；大肠埃希菌检查，取1：10的供试液10ml，置胆盐乳糖培养基500ml中，依法检查（中国药典2010年版二部附录Ⅺ J）。 8、方法验证试验 8.1、菌液制备 8.1.1 将枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的新鲜培养物接种至10ml营养肉汤中，33℃培养24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液将上述培养物制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。 8.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中，25℃培养24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液将上述培养物制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。 8.1.3 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基斜面，经25℃培养7天，加入3ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液，洗脱孢子，用带有棉花的球形吸管取出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释制成每1ml含孢子数50～100cfu的悬液 8.2、计数培养基适用性检查 取上述制备的枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌菌液各1ml（50~100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀凝固后置于33℃培养48小时后，计数；取上述制备的白色念珠菌液、黑曲霉菌液各1ml（50~100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀凝固后置于25℃培养72小时，计数；同时用相应的对照培养基替代被测培养基进行上述试验。如果被测培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基的菌落一致，判断该被测培养基