1.1DNA重组技术的基本工具公开课讲解.pptVIP

* * * 第1节 DNA重组技术的 基本工具 第一章 基因工程 （人工、体外操作、分子水平、定向改造生物性状） 　　苏云金杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 苏云金杆菌 毒蛋白 （Bt基因） （供体细胞） （受体细胞） （Bt基因） 1.1 基本工具 一、 “分子手术刀” ——限制酶 主要来源：原核生物 Ⅰ 基因工程 切割外源DNA， 自身防御 寻根问底 p4左 限制酶的种类与命名： 现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制酶。 EcoRⅠ SmaⅠ 粘质沙雷氏杆菌 （Serratia marcesens） 大肠杆菌 （Escherichia coli R） 练习： 流感嗜血杆菌( Haemophilus influenzae )的d菌株中 先后分离到3种限制酶，则分别命名为: HindⅠ、HindⅡ、HindⅢ A A A T G C T A T T C G A DNA（脱氧核糖核酸） DNA双链（脱氧核苷酸链） DNA双链（脱氧核苷酸链） A A A T G C T A T T C G A DNA（脱氧核糖核酸） 碱基 磷酸 二酯键 脱氧核糖 磷酸 脱氧核苷酸 1.1 基本工具 一、“分子手术刀” ——限制酶 主要来源：原核生物 作用特点： 作用位点： A A A T G C T A T T C G A Ⅰ 识别双链DNA分子特定的（脱氧）核苷酸序列并切割 磷酸二酯键 基因工程 DNA双链（脱氧核苷酸链） EcoRⅠ （在G与A之间切割） 黏性末端 中轴线 A A A T G C T A T T C G A 磷酸 二酯键 EcoRⅠ （在G与A之间切割） SmaⅠ （在G与C之间切割） 黏性末端 平末端 中轴线 中轴线 回文序列 图1-3 切割DNA分子时产生的两种不同末端（箭头表示酶的切割位置） 作用结果 1.1 基本工具 二、“分子缝合针” ——DNA连接酶 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 Ⅰ 基因工程 EcoRⅠ切此位点 EcoRⅠ切此位点 双链断开 不同来源的DNA片段结合 图1-4 DNA分子的切割和连接 E·coliDNA连接酶 * * *