线粒体ATP敏感钾通道与钙激活钾通道激活对正常与缺血脑线粒体通透.PDFVIP

维普资讯 14 Chin_lApplphvsiol2007；23(1 线粒体 ATP敏感钾通道与钙激活钾通道激活对正常 与缺血脑线粒体通透性转变的影响 沈 方 一，吴莉萍 ，刘伟 国 ，陆 源 ，梁华为 ，夏 强 △ (1．浙江大学医学院生理学教研室，2．附属第二医院神经外科，浙江 杭州 310031) 摘要 目的：明确线粒体ATP敏感钾通道与钙激活钾通道对正常和缺血脑线粒体渗透性转变的作用。方法：实 验采用分光光度法，在分离的线粒体上分别观察两种线粒体钾通道激动剂对正常与缺血脑线粒体肿胀的影响。结 果：在正常脑线粒体，diazoxide与NS1619能有效抑制由钙诱导的线粒体 20下降，但其效应可被atractyloside所阻 断。与正常相比，缺血损伤后的脑线粒体在钙离子诱导下线粒体 2l】下降较快，diazoxide与NS1619仍可抑制 由钙 诱导的线粒体 20下降，其作用同样为 atractylc~side所阻断。结论：线粒体ATP敏感钾通道与钙激活钾通道激活 在离体条件均具有保护脑线粒体的作用，其作用可能是通过影响线粒体通透性转变而实现。 关键词： 线粒体ATP敏感钾通道； 线粒体钙激活钾通道； 线粒体通透性转变； 脑缺血 中图分类号：R329．2 文献标识码：A 文章编号：1000—6834(2007)01—0014—05 脑缺血时由于Na一K 泵功能障碍 ，导致细胞 司I，J、牛血清蛋 白(e~sA)购 自物美生物工程公司；考 内、外离子稳态破坏，出现Na 、Ca2通道的病理性 马斯亮蓝测定试剂盒购 自南京建成生物工程研究 开放，继而导致细胞 内钙超载、兴奋性氨基酸释放、 所 。 自由基产生等一系列病理性损伤事件，最终造成神 1．2 大鼠脑线粒体的分离 经元的变性和死亡 。在这一病理过程 中，线粒体通 成年雄性 SD大鼠(240～260g)禁食过夜后按 透性的转变起着关键性作用…1。已有研究显示，如 照Kosenko等l7_的方法进行大鼠脑线粒体的分离。 果可以阻止线粒体通透性的转变，便可以抑制凋亡 正常线粒体组大鼠用 4％的水合氯醛 (1ml／kgip) 的发生，从而起到细胞保护作用_2j。线粒体ATP敏 麻醉后断头，迅速取出鼠脑 ，弃去脑于与小脑 ，大脑 感钾通道 (mitoKAwe)的开放剂(如 diazoxide)能够诱 分成左右两半球(60s)，分别转移至 15ml冰冷的分 导产生缺血预处理效应，从而在缺血 ／复灌过程中保 离缓 冲液 中(含 250mmol／Lsucrose，10mmol／L 护心肌细胞，而预处理保护机制的核心正是在于阻 HEPES，1g／LBSA 和 1mmol／LK EDTA，pH 止线粒体通透性的转变_3J。已有研究表 明，diaz~ 7．4)冲洗、剪碎、匀浆 。按上述方法制得的匀浆 以 xideX~大鼠缺血性脑损伤也具有保护作用，其涉及 2000×g离心 3min，取上清再 以2000×g离心 3 的机制可能与心肌缺血预处理相似_3．4J。另一方 min，第二次的上清以12000×g离心8rain得到颗 面，研究人员在心室肌细胞线粒体内膜上找到了钙 粒状沉淀，即为粗制线粒体。将颗粒状沉淀悬浮于 激活钾通道 (mitoKc~)，并发现其特异性开放剂 不含 EDTA的分离缓冲液 中，12000×g离心 10 NS1619具有与 diazoxide相似 的心肌保护作用_5J。 min，最终获得的沉淀用不含 EDTA的 1m1分离缓 最近