家蚕CathepsinB基因表达研究-特种经济动物饲养专业论文.docxVIP

摘要CathepsinB是一种存在细胞溶酶体中的蛋白酶，主蛩起分解组织细胞蛋白 摘要 CathepsinB是一种存在细胞溶酶体中的蛋白酶，主蛩起分解组织细胞蛋白 质的作用。CathepsinB的酶活性中心由半胱氨酸残基组成，为半胱氨酸萤白酶 类。由于CathepsinB与缅脆内外酌许多生理现象密切福必，对予解释体淹复杂 的调控机制具有重要意义。本文j嫩用分予生物学方法、多肽合成技术和免疫组 织纯学方法，首次蒸统、深入逢分析了家蚕CathepsinB(简称BmCtB)蒺园奁 转泉水平(mRNA水平)，翻译水平(蛋白质合成水平)和细胞水平的表达变 诧，获褥了该基因其有缀织表达特异往耱发育辩期表逡特要瞧懿结果，这鸯 CathepsinB分子生物学的进一步研究以及昆虫变态机理的研究提供了基础。主 要维采有下歹孽露部分： 1．BmCtB基因mRNA分析 番l躅赢瀣夔BmCtB eDNA终模扳，合成了蠢Digoxigenin(DIG)标记豹 eDNA探针。通过Northern印迹杂交分析法，系统地分析了BmCtB基因在不 嗣维织，誉疑发商辩絮豹袋达持黪性，势对不同曩孪期豹基霆表达量进行7比较 分析。 麸对窳蚕变凑期丝艨、中肠、黯肪钵和盘琢越Northern印迹杂交结果显 示：BmCtB基因在丝腺、中肠和脂肪体中不能表达，只能在血球中表达，说明 BmCtB基因表达其有组织特异性。 BmCtB基因不同发育时期袭达变化结果表明：在5龄熟鬣前的幼虫期， BmCtB基因不能转录合成mRNA，熟蚕后，开始转录食成mRNA，化蛹后， BmCtB mRNA检磁量急劂增加，说明BmCtB基因表达鬃有发商时期特异性。 BmCtB在赢球中转录合成mRNA量随发育时期不同而发生焚化。化蛹前， BmCtB mRNA置都维持程较低水平，纯蛹后，BmCtB mRNA薰显著增加，记 蛹15h，BmCtB mRNA量达到最大值，此后开始减少。 2．BmCtB抗获撬俸酶稍备 利用已知的BmCtB eDNA序列推测的氨基酸序列，通过分析氨基酸序列 的繁求侄耦蔬东魏区域，良及抗凝指数等，设诗并台戒了一释骞15令氨基酸 残基组成的多肽，作为BmCtB免疫原性肽。获得的BmCtB抗肽抗体能与天然 BmCtB蛋囱震发囊免疫交叉反盛，箕获体豹潦囊透瑟1；2000。 3．BmCtB基因袭达蛋白质分析 弱爝BmCtB撬默撬俸，逶避免疫稼迹饔免疫检测法努辑了BmCtB蛋自 质的分子攫及表达量。BmCtB成熟蛋白质分子激为30ku，比BmCtB cDNA推 测的蛋自蕨分子豢少7。55ku，表明该蛋热囊在会戏后受到剪切。 BmCtB蛋肉质在不同发育时期表达量有鼹著差异。化蛹前36h，BmCtB I 虽臼质开始表达，但化蛹前BmCtB蛋白质表达燕都很低；化蛹后，蛋白质表 虽臼质开始表达，但化蛹前BmCtB蛋白质表达燕都很低；化蛹后，蛋白质表 达燕剧增，化蛹后20h达到最高水平。 发现了BmCtB基因开始转泶mRNA时间茸翻译含成蛋白质时间的差异 性，表明BmCtB基困表达开始H寸期在转录和翻译水平都受到调控，丽真核基 因袭达时精受到转录和释译二个水平调控是极少的。 4．BmCtB基因在细胞水平表达分析 逯{妻免疫维织纯学攘术，努耩了BmCtB基瓣在矗球维臆审静表达将鼻性， 结果表明；BmCtB基因只在血球的颗粒细胞中表达蛋白质，而在其他类型的血 球缩耱孛不能表遮。不闲发育对糕，颥黢缨麓表达BmCtB基戮弱绥魏跑率不 同，化蛹前36h，表达BmCtB蛋白质的颗粒细胞只占念血球细胞数的2．2％， 纯蛹嚣，裘运懿鬏粒鲴稳占全盘球数戆14．8％，纯蛹薏24h，裘达熬鬏粒缨魏 占垒血球的59．1％，而占m球中垒颗粒细胞数的99％左右。 2 Studies Studies on Expression of Bombyx mori Cathepsin B Gene Abstract Cathepsin B，a kind of proteinase in cytolysosome，is involved in the histolysis and cytolysis as proteolytic enzyme．It also belongs to cysteine proteinase for the existence of cysteinyl residue in the enzyme’S active sites．Cathepsin B has close relationship with many physiological phenomena in and out of cells．It is important for explaining the complex regulation m