急性白血病MLL基因重排的检测及临床特点研究以及基因断裂融合检测新方法初探-血液内科学专业论文.docxVIP

比值法要求的入选标本最低原始细胞比例。2．4 比值法要求的入选标本最低原始细胞比例。 2．4 B／C比值法准确性验证 选取30例己知PMIJRARa阳性标本和正常对照各30例以B／C比值法检测，计算B／C 值，进行统计学分析； 常规RT-PCR方法检测PMIffRARa、AMLI／ETO融合基因和MLL基因重排阳性者， 分别作B／C比值法检测，计算B／C值，与J下常对照比较。 结果 1 AA几中MLL基因重排及特点 1．1在171例AML中MLL基因重排者占7．6％(13／171)，FAB分型中7例为M5，4 例为M4，2例为M2。MLL基因重排者白细胞数(WBC)显著增高，髓系抗原表达均为阳性， 其中3例合并CDl9或CD22等淋巴系抗原表达。 1．2 13例MLL基因重排阳性AML中2例MLL／AF6，4例MLUAF9，1例 MLUAFl7、1例MLI／ELL，2例MLUAFl0，3例MLL．PTD。 1．3 13例MLL基因重排阳性AML中12例接受治疗，10例患者获得完全缓解 (complete remission，CR)。但总生存期较短。 1．4对8例AML患者定期监测相应的MLL基因重排，发现持续阴性者可长期存活， 阳性者则很快复发。 2 ALL中MLL基因重排及特点 2．1在76例ALL中MLL基因重排者占10．56％(8／76)，均为B—ALL。其中4例MLL／AF4 和1例MLFENL为pro—B ALL，其余3例为tore．B／common B—ALL。8例MLL基因重排 ALL中CDl9、CD79a或CD22等淋巴系抗原表达均为阳性，其中2例合并CDl3或cD33 等髓系抗原表达。 2．2其中MLL／AF4有4例，MLI，ENL、MLL-PTD、MLL／AF6和MLL／AFl0各l例。 2．3 8例MLL基因重排ALL接受治疗，获得CR。 2．4对6例ALL患者CR后定期监测相应的MLL基因重排，发现持续阴性者可长期 存活，阳性者则很快复发。 3 B，C比值法的建立 3．1 B／C比值法PCR反应条件的建立根据扩增曲线，确定RARa、AMLI和MLL 基因最佳线性扩增循环数分别为30、30和3l。 3．2骨髓原始细胞比例的B／C比值法纳入标准对11组不同比例混合的NB4细胞和 K562细胞，及PMI_／RARa融合基因阳性标本与正常对照细胞不同比例混合的标本，检测 RARa的B／C值，进行统计学分析。确定该方法适用的最低原始细胞比例为30％。 3．3 B／C比值法准确性验证 原始细胞30％以上的PML-RARa融合基因阳性与正常对照各30例进行PCR反应， PML-RARa融合基因阳性B／C比值为(O．5605_+0．1853)，与正常对照(1．1396x-0．1147)比较有显 II 山西医科大学博士学位论文著的统计学意义(p，o．05)。 山西医科大学博士学位论文 著的统计学意义(p，o．05)。 原始细胞30％以上的AMLl．ETO融合基因阳性16例与正常对照标本20例比较，B／C 比值有显著的统计学意义(Po．05)； 原始细胞30％以上的MLL基因重排17例与正常对照标本20例比较，B／C比值有显 著的统计学意义(p0．05)。 3．4 B／C比值异常的标本发现15例AMLl一ETO融合基因阴性而AMLI B／C比值异 常的标本和2例MLL基因重排阴性而MLL B／C比值异常的标本。 结论 l多重RT-PCR是临床检测MLL基因重排较为精确和灵敏的方法。 2在AML中MLL基因重排是FAB亚型M4和M5常见的基因改变，多见于WBC 增高患者；ALL中MLL基因重排以MLL／AF4为主，多见于pro—B ALL。MLL基因重排 的急性白血病AL患者CR率与阴性者无明显差异，但预后较差。 3 MLL基因重排可作为MRD的监测指标，在AL判断复发和治疗方案的个体化选择 及预后方面有重要意义。 4 B／C比值法是一种创新性的方法。实质是一种半定量PCR方法，是一种有效的判 断RARa、AMLI和MLL基因断裂融合的方法，可作为临床患者常规RARa、AMLl和 MLL融合基因检测的补充方法，对涉及RARot、AMLl和MLL基因的融合断裂进行初筛。 断裂位点恒定的其它基因断裂融合也可设计应用该方法进行检测。 [关键词]急性白血病，融合基因，MLL，RARo【，AMLl Ul 山西医科大学博士学位论文Study 山西医科大学博士学位论文 Study on expression and clinical characteristics of acute leukemia with MLL gene rearrangement detected by multiplex neste