裂殖壶菌油脂水酶法提取工艺优化与其脂肪酸组成分析.docVIP

裂殖壶菌油脂水酶法提取工艺优化及其脂肪酸组成分析 徐华 张茹 刘连亮 张进杰 杨文鸽 楼乔明 （宁波大学海洋学院，宁波 315211） 摘 要 本文采用水酶法对裂殖壶菌油脂的提取工艺进行研究，通过单因素和正交试验优化提取工艺条件，并对裂殖壶菌油脂的脂肪酸组成进行分析。试验结果表明，水酶法提取裂殖壶菌油脂的最佳工艺条件：复合酶配比2:8（纤维素酶:中性蛋白酶，U:U），液料比4 mL/g，加酶量2500 U/g，酶解温度55 ℃，酶解时间4 h；在此优化条件下，裂殖壶菌油脂提取率为82.47%。裂殖壶菌油脂脂肪酸以C14:0、C16:0、C22:5n-6和C22:6n-3为主，其脂肪酸组成简单，且C22:6n-3含量高达32.65%，表明裂殖壶菌油脂具有很高的营养价值和功能性油脂的开发潜力，可作为C22:6n-3的重要食药来源。 关键词 裂殖壶菌 水酶法 油脂提取 脂肪酸 中图分类号：TS251.9 文献标识码：A 文章编号：1003-0174（ ） - - 裂殖壶菌（Schizochxtrium sp.），又名裂壶藻，其属于真菌门（Eumycota）、网粘菌纲（Labyrinthulomycetes）、破囊壶菌目（Thraustochytriales）、破囊壶菌科（Thraustochytriaceae）的一类类藻的海洋微生物[1]。裂殖壶菌的菌体脂质含量丰富，且以甘油三酯为主，DHA占总脂肪酸含量的30-40%，被认为是一种理想的DHA新生资源。目前，从裂殖壶菌中提取制备高纯度DHA已日益成为国内外海洋生物技术的研究热点[2-3]。 水酶法是近年来广泛研究的一种油脂提取新技术，是将生物酶制剂应用于油脂分离的方法，通过酶制剂对油料底物的降解作用，提高油脂出油率；该方法具有选择性降解、副产物少、出油率高、油质好等优点[4-5]。因此，本文采用水酶法对裂殖壶菌油脂的提取工艺进行研究和优化，以期为裂殖壶菌油脂提取及后续工业化应用提供一定的理论依据。 1　材料与方法 1.1 材料与试剂 裂殖壶菌（Schizochxtrium limacinum）干粉：购于厦门汇盛生物有限公司，经Folch法测定，其油脂含量为44.63%。菠萝蛋白酶（50万U/g）、木瓜蛋白酶（80万U/g）、酸性蛋白酶（80万U/g）、碱性蛋白酶（20万U/g）、中性蛋白酶（20万U/g）和纤维素酶（5万U/g）：均为食品级试剂酶，购于江苏锐阳生物科技有限公司；37种脂肪酸甲酯混合标准品：购于美国Sigma公司；甲醇、氯仿、正己烷：均为分析纯，购于天津市科密欧化学试剂公司。 1.2 仪器和设备 6890N型气相色谱仪、5973型质谱仪：美国Agilent公司；Laborota 4000 efficient旋转蒸发器：德国海道尔夫公司；AB135-S型精密电子分析天平：瑞士梅特勒-托利多公司；WD750CTL23-6型微波炉：格兰仕微波炉电器有限公司；THZ-82型水浴恒温振荡器：常州国华电器有限公司。 1.3 试验方法 1.3.1 水酶法提取的工艺流程 裂殖壶菌干粉→加水→微波预处理→酶解→正己烷萃取→减压浓缩→油脂 提取工艺要点：取2 g裂殖壶菌干粉，按一定液料比加入蒸馏水，并微波5 min（微波频率2450 MHz，输出功率450 W）；待样品冷却至室温，加入一定量的酶制剂，放于水浴恒温振荡器中60 r/min进行酶解。酶解结束后，按裂殖壶菌干粉质量，以2 mL/g的用量加入正己烷，振荡萃取2 min，于5000 r/min离心5 min，收集上层正己烷相，重复萃取2次，合并正己烷相；经40 ℃减压浓缩后，于105 ℃干燥至恒重，称取油脂质量，并计算裂殖壶菌油脂提取率。油脂提取率的计算公式为： 1.3.2 酶的选取和复合酶配比的确定 取2 g裂殖壶菌干粉，按2 mL/g的液料比加入蒸馏水，微波处理后，按1000 U/g的添加量分别加入纤维素酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶，并以不加酶制剂为对照，于50 ℃恒温水浴酶解3 h，酶解结束后用正己烷萃取油脂，计算裂殖壶菌的油脂提取率；并以纤维素酶和中性蛋白酶组成复合酶，测定两者间的配比对裂殖壶菌油脂提取率的影响。 1.3.3 单因素和正交优化试验 在复合酶配比为2:8（纤维素酶:中性蛋白酶，U:U）的基础上，以液料比、加酶量、酶解温度和酶解时间为因素，以油脂提取率为指标进行单因素试验；并综合单因素试验结果，采用极差法对上述4个因素进行正交优化试验，正交因素水平表见表1。 表1 正交设计因素水平表 水平 因素 A 液料比 （mL/g） B 加酶量 （U/g） C 酶解温度 （℃） D 酶解时间 （h） 1 3 1500 45 3 2