植物生理学综合设计实验(2013级)课件.ppt

3.1 植物材料的种类和采集 3.2 样品测定前处理和保存 3.3 待测样品的提取、分离和纯化 3.4 样品的测定及分析 3.5 实验数据处理和统计分析 3.6 实验报告 3 基本过程 3.1 植物材料的种类和采集 根据来源可划分为天然的植物材料(如植物的根、茎、叶等)和人工培养的植物材料(如杂交后代材料、突变体、愈伤组织等)两大类； 按水分状况、生理状态可划分为新鲜植物材料和干材料两大类。 3 基本过程 3.1 植物材料的种类和采集 要根据实验目的分别采集植株的不同部位，如根、茎、叶、果实，不能将各部位样品随意混合。 其次，植物材料的采集还具有适时性，即在植物不同生长发育阶段，或各种处理前后，适时采样分析。 此外，在操作和处理过程中还要防止样品变质和污染。 原始样品的取样法 随机取样：在实验区(或大田)中随机确定取样点，取样点的数目视田块的大小和样品需要量而定。 对角线取样：可在实验区按对角线选定五个取样点，然后在每个点上随机取一定数量的样株，或在每个取样点上按规定的面积从中采取样株。 平均样品取样 混合取样法：一般颗粒状(如种子等)或已碾磨成粉末状的样品可以采取混合取样法进行。 将供采取样品的材料铺在平面上成为均匀的一层，按照对角线划分为四等分。 取对角的两份为进一步取样的材料，而将其余的对角两份淘汰。 再把留下的两份样品充分混合后重复上述方法取样。反复操作，每份均淘汰50％的样品，直至所取的样品达到所要求的数量为止。 平均样品取样法 按比例取样法：有些材料在生长不均等的情况下，应将原始样品按不同类型的比例选取平均样品。 例如块根、块茎材料选取平均样品时，应按大、中、小不同类型的样品的比例取样，然后再将每一个样品纵切剖开，每个切取1/4、1/8或1/16，混在一起组成平均样品。 在采取果实的平均样品时，一般选数株果树为代表，即使是从同一株果树上取样，也应考虑到果枝在树冠上的各个不同方位和部位以及果实体积的大、中、小和成熟度上的差异，按各相关的比例取样混合成平均样品。 取样地点 取样地点一般在距田埂或地边一定距离的株行取样，或在特定的取样区内取样。取样点的四周不应有缺株的现象。 取样数量 应根据分析项目数量、样品制备处理要求，重复测定次数等需要，采集足够数量的样品。新鲜样品可按含水分80％～90％计算所需样品量。选取平均样品的数量应当不少于供分析用样品的两倍。 取样时期 在植物的不同生育时期先调查植物的生育状况并区分为若干类型，按各种类型株所占的百分比，采取相应数目的样株作为平均样品。 3.2 样品测定前处理和保存 采回新鲜样品后，全植株样品应按根、茎、叶、种子等分开。 净化： 新鲜样品从田间或实验地取回时，常沾有泥土等杂质，应用柔软的湿布擦净，不应用水冲洗。 杀青：为了保持样品化学成分不发生转变和损耗，务必及时终止样品中酶的活动，这就需要将样品置于110℃的烘箱中杀青15～20 min。 烘干：样品经过杀青之后，应立即降低烘箱的温度，维持在70～80℃直到样品烘干至恒重为止，一般样品所需时间大约为一天。 3.2 样品测定前处理和保存 测定植物材料内易挥发、转化和降解的物质，如酚类、亚硝酸盐等，测定营养成分如维生素、氨基酸、糖、植物碱等，应使用新鲜样品。 此外，测定植物中激素含量和酶的活性，也需要用新鲜样品。 取样时应注意保鲜，取样后应立即进行待测组分提取，也可采用液氮冷冻保存或冷冻真空干燥法得到干燥的样品，放在超低温冰箱中保存备用。 3.2 样品测定前处理和保存 一般种子的平均样品清除杂质后要进行磨碎，在磨碎样品前后都应当清洁磨粉机内部，过筛后混合均匀，贮存于磨口玻塞的广口瓶中，并随即贴上标签，注明采集地点、实验处理、采样日期和采样人姓名等。 油料作物种子如需要测定其含油量时，不宜使用粉碎机，应将样品放在研钵磨碎或用组织捣碎机捣碎，也可用切片机切成薄片作为分析样品。 * 要求：提取过程中待测组分不受损失，不被污染，全部转变成适宜测定的形式。提取前应用适宜方法匀浆后再提取待测成分。 方法：水浸提是常见的，一切可在水中溶解的物质都可采用该法。酸浸提：有些物质用水浸提时不能完全溶解或耗时较长，如土壤缓效钾待测液的制备。有机溶剂浸提：有些样品组分不溶于水而溶于有机溶剂，先将待测成份浸提出来再进行分析测定，常用的有机溶剂有乙醇、乙醚、石油醚等。 3.3 待测样品的提取、分离与纯化 待测组分的提取 待测组分的分离纯化 A.盐析：向含有待测组分的粗提取液中加入高浓度中 性盐达到一定的饱和度，使待测组分沉淀析出的过程。 蛋白质、酶、多糖、核酸等都可用盐析技术进行沉淀分离。盐析法在等电点时效果最好，但蛋白质沉淀中含有大量无机盐，这些无机盐需用透析等方法除去。