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广东医学院分析中心 《仪器分析》光谱分析法导论 医学检验本科教学课件 第2章 光谱分析法引论 主要内容（了解）： ⒈光学分析法与光谱分析法的定义 ⒉光谱分析法的分类：分子光谱、原子光谱 发射光谱、吸收光谱 ⒊光谱仪器的结构： 光源、单色器、吸收池 检测器、显示系统 光学分析法（optical analysis）:根据物质发射的电磁辐射或电磁辐射与物质相互作用而建立起来的一类仪器分析方法。 常见电磁辐射与物质作用的术语 吸收：原子、分子或离子吸收光子的能量，从基态跃迁至激发态的过程。 发射：物质从激发态跃迁回基态，并以光的形式释放出能量的过程。 散射：光通过介质时，光子与介质分子之间发生碰撞，导致光子运动方向改变。 折射和反射:当光从介质1照射到与介质2的界面时，一部分光在界面上改变方向返回介质1，称为光的反射；另一部分光则改变方向，以一定的折射角度进入介质2，称光的折射。 干涉：在一定条件下光波相互作用，当其叠加时，将产生一个其强度视各波的相位而定的加强或减弱的合成波。 衍射：光波绕过障碍物或通过狭缝时，以约180?的角度向外辐射，波前进的方向发生弯曲。 §2.1 光学分析法及其分类(P6~7) 光学分析法的分类 光谱分析法：基于物质的光谱建立起来的分析方法。测量物质与辐射能作用时，物质内部发生量子化的能级跃迁而产生的吸收、发射或散射辐射的波长和强度。 非光谱法：基于物质与辐射相互作用时，测量辐射的某些性质，如折射、干涉、衍射等变化的分析方法。不涉及物质内部的能级跃迁。 一、分子光谱法和原子光谱法 （一）发射光谱法 物质通过激发过程获得能量，变为激发态原子或分子M* ，当从激发态过渡到低能态或基态时以辐射的方式释放能量，产生发射光谱。 M* ?? M + hv 1. ? 射线光谱法 天然或人工放射性物质的原子核在衰变的过程中发射?和?粒子后，使自身的核激发，然后核通过发射?射线回到基态。测量这种特征?射线的能量（或波长），可以进行定性分析，测量?射线的强度（检测器每分钟的记数），可以进行定量分析。 放射测定法在医学检验中的应用例子： 放射免疫测定法：激素及代谢产物 肾上腺素（E）、 去甲肾上腺素（NE） 甲状腺激素（T3\T4） 蛋白质和肽类激素（催产素、生长激素） 放射测定法：菌血症、菌尿症诊断、菌种鉴定、分枝杆菌快速培养及抗菌素敏感试验 3. 原子发射光谱分析法（AES） 用火焰、电弧、等离子炬等作为激发源，使气态原子或离子的外层电子受激发发射特征光谱。波长范围在190 ~ 900nm。 AES在医学检验中应用 血液电解质：Na、K、Ca、Cl、P、Cu、Zn、Mg、Fe ….. 5. 分子荧光分析法 某些物质被紫外光照射后，物质分子吸收辐射能而成为激发态分子，然后在回到基态的过程中发射出比激发光波长更长的荧光。 测量荧光的强度可作高灵敏度定量分析。荧光波长在紫外-可见光谱区。 6. 分子磷光分析法 物质吸收光能后，基态分子中的一个电子被激发跃迁至第一激发单重态轨道，由第一激发单重态的最低能级，经系统间交叉跃迁至第一激发三重态（系间窜跃），并经过振动弛豫至最低振动能级，由此激发态跃迁回至基态时，便发射磷光。 7. 化学发光分析法 由化学反应 提供足够的能量，使其中一种反应物分子的电子被激发，形成激发态分子。激发态分子跃迁回基态时，发出一定波长的光。其发光强度随时间变化。在合适的条件下，峰值与被分析物浓度成线形关系，可用于定量分析。 由于化学发光反应类型不同，发射光谱范围为400 ~ 1400nm。 当物质所吸收的电磁辐射能与该物质的原子核、原子或分子的两个能级间跃迁所需的能量满足△E = hv 的关系时，将产生吸收光谱。根据物质对不同波长辐射能的吸收，建立各种吸收光谱法。 吸收光谱： M + hv ?? M* 发射光谱： M* ?? M + hv 3.紫外-可见分光光度法 利用溶液中的分子或离子在紫外和可见光区产生分子外层电子能级跃迁所形成的吸收光谱，进行定性和定量测定的方法。 波长范围200～800nm UV-VIS在医学检验中的应用 血红蛋白测定：氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法：540nm 十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）测定法：538nm、540nm 尿液蛋白质检测：丽春红-S法：560nm 考马斯亮兰法：600nm 尿糖检测：葡萄糖氧化酶比