极低频电磁场对中脑神经前体细胞分化的作用及其机制研究-神经生物学专业论文.docx

英文缩写表GAP43 英文缩写表 GAP43 生长相关蛋白43 growth—as sociated protein 43 DAB 二氨基联苯氨 3，3’一diaminobenzidin GAPDH 3．磷酸甘油醛脱氢酶glyceraldehyde phosphate dehydrogenase STAT3 signal tran sducer and activator of transcription 3 FCM 流式细胞测量术 flow cytometry RT．PCR 逆转录聚合酶链式反应reve rse transcriptase-polymerase Chain reactiOn bHLH basic helix—loop-helix transc ription facto r ma shl mammalian achaete—SCute homologue 1 Ngn neurogenin 2 中文摘要极低频电磁场对中脑神经前体细胞分化的作用及其机制 中文摘要 极低频电磁场对中脑神经前体细胞分化的作用及其机制 研究 中文摘要 神经前体细胞治疗正成为帕金森氏病等神经变性疾病极具 前景的治疗策略。但植入正常或病变脑组织的神经前体细胞，常 以星形胶质细胞向分化为主，达不到预期疗效。调控神经前体细 胞向所需表型的神经细胞分化，就成为神经前体细胞移植治疗前 必要的程序。 神经前体细胞的分化方向直接影响其应用效能。它的分化命 运。由外部的细胞环境信号与细胞的内在“程序”共同决定。离 体研究已发现NCAM、PDGF、IL．n等细胞因子可以促进神经前 体细胞的神经元向分化。除细胞因子等化学信号外，细胞环境中 还存在电磁等物理信号。哺乳动物神经系统塑形时，内源性电磁 场的场强、时空分布对神经系统的发育始终作为一个适宜的信号 发挥潜在作用。有报道，爪蟾胚胎神经元神经突可以对小到 7mV／mm(相当于跨生长锥产生不到500 u v的电压差)的场强感 知和反应，而使神经突向着负极生长；电磁场存在时，还观察到 更多的神经元分化成熟。 本研究因此将与大鼠脑电频率相近的5～40Hz频段极低频电 磁场(ELF．EMF S)应用于体外调控中脑神经前体细胞分化方向 的研究，旨在寻找一稳定并能有效增强神经前体细胞神经元向分 化的诱导模式，并从细胞周期动力学分布、发育相关基因转录水 平入手，探讨ELF．EMFs影响中脑神经前体细胞分化效应的可能 机制，为神经变性疾病等的干细胞治疗更快速、有效地应用于临 床提供一定的理论依据。 本研究首先采用含bFGF的无血清悬浮培养方法，获得具有 自我更新和多分化潜能等干细胞样特性的新生大鼠中脑神经前 中文摘要体细胞。在此基础上，较为系统地研究了极低频电磁场对新生大 中文摘要 体细胞。在此基础上，较为系统地研究了极低频电磁场对新生大 鼠中脑神经前体细胞分化的作用及其可能的机制。本研究的主要 结果如下： 1．与自然分化的对照组相比，细胞因子IL—lⅡ(50 pglml) 明显增加中脑神经前体细胞衍生的神经元数目；CNTF(1 0 nglml)、GDNF(1 00 ng／m1)与天麻素(i0。mM)呈现抑制效应： 葛根素(1 0。5 mM)、牛蒡子甙(1 0巧mM)、人参造甙R91(1 0。5 mM) 等3种中药单体及1 7 B一雌二醇(分别1 0～mM、l 0。mM和l 04 mM)对此没有影响。提示IL．1 n是上述化学物质中唯一可用于 体外预处理移植前的中脑神经前体细胞，有望增加植入后神经元 数量的细胞因子。 2．CNTF和IL．1 a对中脑神经前体细胞神经元向分化的效应 与浓度有关：CNTF 0．1 ng／ml和IL—lⅡ50pg／ml组神经元向分化 百分比明显高于自然分化组：CNTF l 0ng／m1组该比例明显低于自 然分化组，IL．1Ⅱi00pg／m1组无明显变化。 3．施加ELF—EMF(5Hz／8mT)后，小剂量CNTF的促进效应增 强，特别是EMF还可使大剂量CNTF抑制神经元向分化的效应转 变为促进神经元向分化；EMF可抑制小荆量IL．1 n促进神经元分 化的作用，但不影响大剂量IL．1 a的诱导结果。显示EMF与CNTF、 IL．1 a的共同效应不是简单的协同或拈抗，提示EMF可能与细胞 因子共同影响应着神经系统的发育。 4．中脑神经前体细胞分别5／10t30／40 Hz(8mT)及5 Hz(4roT) EMF不同时程的体外处理后，其神经元生成数量均增加，以 20Hz，8mT EMF效应最大；ELF．EMFs的此效应具有频率特异性， 场强也是影响因素；1 0t20／40 Hz(8mT)EMFs还可增加衍生于 中脑神经前体细胞的TH阳性细胞数；但各频率EMF对神经突的 延伸均无作用。这提示具有