中心试验室试验指引-中国医学科学院北京协和医院中心试验室.PDF

中心实验室实验指南 自动切胶仪 作者：郭丹 修订日期：2014-9- 18 【目的及应用】： Ettan 点样仪可以将肽段样品和基质转移到靶板的表面，从而进行后续的质谱分析和鉴定。 该仪器主要适用于那些存放于 96 孔板中的肽段样品分析。即可以在使用点样仪中的自动模式， 最多可处理384 个样品；使用手动模式，最多可以处理96 个样品。Ettan 靶板可容纳的样品和 标准总数量为576，VoyangerTM 和BrukerTM 分别为400 和768 。 【试剂及设备】： 1. 设备及配件：Ettan Spot Picker 自动切胶仪 (1) 96 孔微孔板（已编码的聚丙烯材质微孔板，V 型底，编号18- 1150-42 ） (2) Ettan MALDI-TOF MS 点样靶板试剂盒：编号：18-1147-18 (3)带帽小瓶（100 个/包），编号18- 1152-75 2.试剂 2.1 系统溶液 50%乙腈/0.5%TFA 的缓冲液，经过排气和0.2 微米滤膜过滤处理，存放于 Milli-Q 水洗过 编号 ：PUMCHCL-P-3-Q08-1 北京协和医院中心实验室 更新日期：2014/09/18 第1 页,共6 页 中心实验室实验指南 的干净玻璃瓶中。点样仪所使用的工作液既可以用于样品的溶解，又用于探针的清洗。工作液 中的污染物可能导致样品分析时非特异性的噪音信号的产生。推荐的工作液最小体积为 500ml 。 2.2 基质溶液 (1) 饱和的 α-氰基-4- 羟基- 肉桂酸(α-cyano-4-hydroxy cinnamic acid, HCCA) 溶于 50%乙腈 /0.5%TFA 溶液中； (2) 饱和的2,-二羟基苯甲酸( 2,5-Dihydroxybenzoic acid, DHB) 溶于50%乙腈/0.1 %TFA 溶液中。 2.3 用于内部/外部校准的标准肽溶液 肽段名称 单同位素质量(+H) 工作液浓度 检测浓度 溶剂 (ILE7)-Angiotensin III 897.53 20 pmol/μl 3 pmol/μl 50%乙腈 hACTH(18–39) 2465.19 20 pmol/μl 3 pmol/μl 0.5%TFA 【实验步骤】： 1. 开机及系统设置 1.1 系统设置 编号 ：PUMCHCL-P-3-Q08-1 北京协和医院中心实验室 更新日期：2014/09/18 第2 页,共6 页 中心实验室实验指南 1.2 样本点样方式 点样仪中样品的加载可以通过两种方式进行：一种是通过自动批量化模式载入微孔板文件 （*.apb 文件，由Ettan 自动切胶仪产生并经过Ettan 酶切仪更新）；另一种是通过手动模式进行 手动选择。 (1) 自动模式 1) 自动模式屏幕显示了微孔板的文件路径以及其中的样品数量。用户可以通过点击 “Click”键清除以前加载的微孔板文件。 2) 载入微孔板文件后，靶板布局图中将会从第一个尚未使用的位置开始，自动加载入相 应的样品编号信息。 3) 点击微孔板序号（1 至4，黄色框），屏幕中将会显示“Open Plate File”对话框。浏览文 件列表并选中所需要的文件。打开文件的同时，软件将会自动关联该文件和当前点样 程序。 (2) 手动模式 在手动模式下，用户需要通过设置微孔板架中第一块微孔板中的起始孔和终止孔来确定需 要处理的样品。手动模式中一次程序运行最多可以处理96 个样品。 1.3 靶板和靶板布局图