霍乱弧菌毒力基因及基因型的分子流行病学分析-营养与食品卫生专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进 行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何 其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡 献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人 承担。 论文作者签名： Et期： 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保 留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅 和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关 数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本 学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：——导师签名： 日 期： 山东大学博士学位论文霍乱弧菌毒力基因及基因型的分子 山东大学博士学位论文 霍乱弧菌毒力基因及基因型的分子 流行病学研究 摘 要 研究背景 霍乱是一种急性肠道传染病，发病急传播快，波及范围广，危害十分严重， 是我国传染病法规定的甲类传染病，也是当前三种国际检疫传染病之一，是发展 中国家危及人群生命与健康的主要公共卫生问题小”。霍乱弧菌可以分为200多 个血清群，但只有Ol和0139血清群是霍乱的病原菌Ⅲ。自1817年至1923年， 先后发生过六次古典霍乱世界性大流行，每次都殃及我国。古典霍乱在1820年 第一次世界大流行时传人我国，次年传人山东r2】。1961年开始的由El Tot霍乱弧 菌引起的第七次霍乱世界大流行源于印度尼西亚的苏拉威西岛，同年7月传至我 国广东‘”，至今已波及五大洲的140多个国家和地区㈨。0139霍乱于1992年】O 月首先在印度马德拉斯暴发，并迅速蔓延至相邻各国，在一些国家还一度成为引 起霍乱的优势菌，但其优势地位很快又被01群EL Tor弧菌取代‘5’61。1993年在 我国新疆出现0139霍乱弧菌引起的病例口】，1997年山东省首次检出0139霍乱 弧菌[81。 ELTor霍乱于1964年传人山东一】，但并未形成大范围的流行。“十年动乱” 期间，由于霍乱检索和疫情报告系统受到破坏，1965至1975年间无疫情报告。 20世纪80年代和90年代均有较大的流行，形成两个明显的流行期。1979年以 前，山东省分离的霍乱弧菌以小川型为主，从1980年开始，稻叶型代替了tJ、Jlj 型，占绝对优势，疫区也主要集中在鲁南、鲁西南。到1984年，疫区转移到了 黄河以北，小川型又替代稻叶型成为优势菌株，而且形成了黄河以北小川型为优 势菌株、黄河以南稻叶型为优势菌株的独特局面。1985年以后疫情逐年下降， 至1991年无疫情出现。问歇两年后，1993年在烟台、威海等地又开始有疫情出 现，1994年形成以胶东为主要疫区的霍乱流行。疫情从1995年开始向全省各地 扩散，并于1998年以泰安为中心又形成～个小高峰，优势菌株仍为dqll型。但 2001年又突然变为稻叶型1d霍乱流行。2002和2003年全省无霍乱病例报告。 山求大学博上学位论文霍乱弧菌发生菌犁变化的内在原因究竟是什么，仍然是需要进一步研究的深题。 山求大学博上学位论文 霍乱弧菌发生菌犁变化的内在原因究竟是什么，仍然是需要进一步研究的深题。 研究目的 术研究的目的在于阐明山东省不同年代、不同地区收集的霍乱菌株携带的毒 力基因；在分子水平上了解霍乱弧菌毒力基因的分布特点和莆型变迁，探讨其流 行规律，为制定霍乱防治策略提供科学依据。 研究方法 本课题应用分子杂交、PCR技术划1979至2001年问山东省分离、保存的 霍乱菌株CTX基因元件中的ctxA，zot、RSl基因，VPl毒力岛中的tcpA、tcpH、 aldA、toxT、acf8基因，TLC因子中的cri、o,f2．3基因，RTX基因簇中的rtxA、 rtxC以及toxR基因进行了检测；利用噬菌体诱导和转染技术对霍乱弧菌CTXd0 噬菌体进行诱导及转染检测，对毒力基因的水平转移能力进行了研究；用rRNA 分型技术对不同年度从不同地区收集的部分霍乱弧菌的基因型进行了分析。 主要结果 1．原位杂交的结果表明，侄180株1980～2001年间不同地区分离到的霍乱 弧菌中，有168株携带CTX基因元件的ctxA、zot，RSl基因，阳性率均为93．33％， 表现出高度的一致性。其中流行株CTX基因元件的携带率为97．66％，而非流行 株CTX基因元件全部阴性。 2．用斑点杂交方法检测不同时期的28株Ol群霍乱弧菌，所有被检菌株都 具ToxR、RTX带j关毒力基因，26株ol群菌株同时检出了VPI毒力岛基因，其 中25株还同时具有倪于CTX基因元件的基因。柱1980—1987年