发酵工程的灭菌与空气除菌.pptVIP

第五章 发酵工程的灭菌和空气除菌;本章内容;1) 生产菌和杂菌同时生长，生产菌丧失生产能力； 2) 在连续发酵过程中，杂菌的生长速度有时会比生产菌生长得更快，结果使发酵罐中以杂菌为主； 3) 杂菌及其产生的物质，使提取精制发生困难； 4) 杂菌会降解目的产物；杂菌会污染最终产品； 5) 发酵时如污染噬菌体，可使生产菌发生溶菌现象。;第一节 常用的灭菌方法;第一节 常用的灭菌方法;二、工业生产中的灭菌 1、工业上具体措施包括: （1）使用的培养基和设备须经灭菌； （2）好氧培养中使用的空气应经除菌处理； （3）设备应严密，发酵罐维持正压环境； （4）培养过程中加入的物料应经过灭菌； （5）使用无污染的纯粹种子。 ;二、工业生产中的灭菌 2、培养基灭菌的目的 杀灭培养基中的微生物，为后续发酵过程创造无菌的条件。 3、培养基灭菌的要求 （1）达到要求的无菌程度(10-3)。 （2）尽量减少营养成分的破坏，在灭菌过程中，培养基组分的破坏，是由两个基本类型的反应引起的： 培养基中不同营养成分间的相互作用； 对热不稳定的组分如氨基酸和维生素等的分解。;4、灭菌的方法 （1）化学法（化学药品灭菌法）： 化学药品直接作用于微生物而将其杀死的方法。消毒剂与防腐剂的区分并不严格。 灭菌机理： 化学物质（高锰酸钾、漂白粉等）与微生物细胞中的某些成分产生化学反应，如蛋白质变性、核酸的破坏、酶的失活、细胞膜透性的改变而杀死微生物。 ;常用的化学药剂： 石碳酸、甲醛、氯化汞、碘酒、酒精等。主要用于生产车间环境、无菌室空间、接种操作前小型器具及双手的消毒等以及染菌后的培养基。 根据灭菌对象的不同使用方法有浸泡、添加、擦拭、喷洒、气态熏蒸等。;（2）物理法 ①射线灭菌法： 利用紫外线、高能电磁波或放射性物质产生的γ射线进行灭菌的方法。波长范围在200～275nm的紫外线具有杀菌作用，杀菌作用最强的范围是250 ～270nm，波长为253.7nm的紫外线杀菌作用最强。 在紫外灯下直接暴露，一般繁殖型微生物约3 ～5min，芽孢约10min即可杀灭。;紫???线灭菌机理： 在紫外线照射下微生物细胞的DNA遭到破坏，形成胸腺嘧啶二聚体和胞嘧啶水合物，抑制DNA的复制。此外，空气在紫外线照射下生成的臭氧也有一定的杀菌作用。;（2）物理法 ②干热灭菌法 ： 灭菌机理：在干燥高温条件下，微生物细胞内的各种与温度有关的氧化还原反应速度迅速增加，致死微生物。 灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属器材和其他耐高温的物品在干热灭菌器中，于160℃下保存1h。有纸或棉塞者灭菌不能超过170℃。 ;（2）物理法 ③ 过滤除菌： 使用适当的过滤材料或介质对液体或气体进行过滤，除去微生物的方法。 主要适用于：热敏感物质（生长因子、抗生素、培养基）的灭菌和发酵用无菌空气的制备。 ;④湿热灭菌法： 利用饱和蒸汽进行灭菌。释放大量热量和强大穿透力使生物大分子化学键受到破坏。常用于培养基、发酵设备、附属设备、管道和实验器材的灭菌。 煮沸灭菌法：将物品在水中煮沸15-20min，一般微生物细胞可杀死，但不能杀死孢子。适用于食品、器具消毒。无芽孢菌用60℃ 10min，芽孢用100℃ 10min以上，嗜热细菌用120℃ 20-30min可完全杀死。 ;间歇灭菌法： 反复几次的常压蒸汽灭菌，已达到杀死微生物营养体和芽孢的目的。100 ℃ 30-60min而杀死微生物营养体，置37 ℃培养1h，使其芽孢发育成营养体，次日再同样的方法处理，反复3次。适用于不能高压灭菌的物质，如糖类、明胶、牛奶培养基等。 高压蒸汽灭菌： 使用密闭的高压蒸汽灭菌锅。实验室常用压力为0.1兆帕（MPa，一公斤的压力），121 ℃ 15-30min，可杀死各种微生物及芽孢。常用于培养基、发酵设备、管道、实验器材等。 ;第二节 培养基与发酵设备的灭菌;一、影响培养基灭菌的因素;（3）培养基pH pH对微生物耐热性影响很大。微生物一般在pH6.0～8.0时最耐热；pH＜6.0，氢离子易渗入微生物细胞内，从而改变细胞的生理反应促使其死亡。pH越低，灭菌所需时间越短。;（5）微生物性质与数量 1) 各种微生物对热的抵抗力相差较大，细菌的营养体、酵母、霉菌的菌丝体对热较为敏感，而放线菌、酵母、霉菌孢子对热的抵抗力较强； 2) 繁殖期的微生物对高温的抵抗力比衰老期微生物抵抗力 小得多； 3) 微生物数量越多，所需灭菌时间越长；