男科学实验室诊断进展.ppt

黄宇烽，主任医师，南京大学教授，国家级有突出贡献中青年专家，享受政府特殊津贴。现任解放军医学会检验医学分会常委、中华医学会男科学分会副主任委员、江苏省医学会男科学分会名誉主任委员、亚洲男科学学会会员、南京医学会男科学分会主任委员、 《中华男科学杂志》主编、《Asian Journal of Andrology 》编委等。 　　　精液分析是评价男性生育能力的最基本检验手段。理论上，精液分析是一个很简单的操作过程，只要将一滴精液置于玻片上，进而确定其相关参数即可。然而，实际上，精液分析所得的每一个参数都需要大量的专业知识、细致认真的操作及必要的质量控制措施。 　　　Keel等报告了美国纽约、哥伦比亚、洛山矶、明尼苏达几百家男科实验室对精子密度、形态学、活率及抗精子抗体的室间质量控制结果，精子密度的结果显示，一份精液标本的精子密度差异范围达3 ~ 492×106 /ml，手工检测的变异系数（CV）为30% ~ 138%，计算机辅助的精液分析（CASA）的CV为24% ~ 99%。不同实验室精子密度的较大差异提示，精子计数方法的不同、计数池种类的不同以及操作的标准化对精子计数结果有着直接的影响。 一、精液常规检查 1、精液检测工具不断更新 （1）血细胞计数板 沿用50余年 （2）Makler精子计数板 1978年以色列Makler发明 （3）Macro精子计数板 （4）Microcell计数池 1990年 Ginabury和Armand发明 一次性使用 （5）2004年，美国Millennium Sciences公司Cell-VU精子记数池和Cell-VU预染色形态载波片。 计算机辅助的精液分析 80年代发展的新技术， 除可分析精子密度、活动百分率等指标外，在分析精子运动能力方面显示了其独特的优越性。 全自动精子分析仪（以色列） Medical Electronic Systems 　　用已知浓度的乳胶珠溶液对目前国际上常用的３种精子计数池进行了评价。 1 材料与方法 1.1 实验材料 1.２ 方法 1.2.1 Cell-VU计数法 1.2.2 Makler计数法 1.2.3 血球计数池法 1.３ 统计学分析 　　　不同计数池的计数结果以x±s表示，样本均数的比较采用t检验 2 结果 Cell-VU计数池的浓度最接近标准乳胶珠的浓度，平均变异系数（CV）分别为7.51%和1.22%，而血球计数池的CV分别为22.11%和13.78%，Makler计数池的CV分别为52.91%和38.72%。 提示，Cell-VU计数池计数结果最准确，而血球计数池和Makler计数池计数结果明显偏高，尤以Makler计数池与标准乳胶珠浓度相差最大，差异达52.91%。 　　　室内质控和室间质控是保证不同实验室结果准确和可靠的重要措施之一。精子计数是男科实验室目前考虑较多的质控项目之一，目前最大的挑战来自精子计数方法学的标准化和监测。本研究显示，Cell-VU计数池的准确性和精确性均优于血球计数池和Makler计数池，与文献报道一致。而且，Cell-VU可一次性或反复多次使用，这在计数传染性较强的样本时将显示出独特的优势。 　　　因此，我们建议要建立一个标准的计数池操作系统用于所有实验室，从而为不同实验室的质量控制评价提供基础，最终提高所有实验室结果的准确性和可靠性。Cell-VU应是此标准计数池的最佳选择。 2.精子功能测定 （1）传统经典的“仓鼠卵穿刺实验” （2）精子-宫颈粘液穿透试验 （3）毛细管穿透试验 （4）低渗肿胀试验 （5）吖啶橙染色(荧光显微镜) （6）精子DNA完整性检测（流式细胞仪） 精子DNA完整性检测（流式细胞仪） 精子DNA完整性检测亦称精子染色质结构分析， SCSA），是应用流式细胞仪检测精子功能的方法之一。精子发生过程中，鱼精蛋白逐步取代组蛋白与DNA结合。精子进入附睾后，鱼精蛋白的组成不再改变。但附睾中精子在逐步成熟的过程中，鱼精蛋白中大量的巯基(SH)不断被氧化成二硫键(S=S)，与DNA结合更加紧密，使DNA更具抗酸能力，维持了双链结构的稳定性。 精子DNA完整性检测（流式细胞仪） 而染色质异常的精子，鱼精蛋白中多数巯基未被氧化，在酸的作用下易变性为单链DNA。根据这一原理，用酸处理精液样品，再行吖啶橙(AO)染色， AO可与双链DNA结合呈单体形式发出绿色荧光，与单链DNA结合呈聚合物形式发出红或黄色荧光。然后通过配有专用软