甘蓝型油菜种子特异性表达fad2基因的ihpRNA载体构建.PDFVIP

2006年 9 月 中国油料作物学报 2006, 28 ( 3) : 251—256 Ch ine se jou rnal of o il crop science s 甘蓝型油菜种子特异性表达 fad2基因的 ihpRNA 载体构建 陈　松 , 张杰夫 , 陈　峰 , 陈新军 , 龙卫华 , 浦惠明 , 戚存扣 (江苏省农业科学院经济作物研究所 ,江苏 南京 2 10014 ) 摘要 : 旨在通过转基因途径诱导油菜种子中 fad2 基因发生转录后基因沉默 ,本文构建了 fad2 基因的 ihpRNA ( ) 植物表达载体 。通过 PCR 扩增分离到甘蓝型油菜种子特异性表达的 N ap in 启动子序列 1147bp 以及油酸脱饱和 ( ) 酶基因 fad2 的一个 537bp 的片段 ,并将它们分别克隆到 p GEM - T easy载体中。利用中间载体 pHurrican 构建 fad2基因的反向重复框 。将 fad2基因片段以正向的方式连接在一个可剪切的内含子的 5 ’末端 ,而以反向的方式 连接到该内含子的 3 ’末端 ;然后将 N ap in启动子序列连接到该反向重复框的 5 ’端 ,而在其 3 ’端接有一个 no s终止 子序列 ;最后将 fad2基因的反向重复表达框分两步克隆到植物双元载体 pCAMB IA2300 的 pUC18 多克隆位点 ,构建 具有种子特异性表达的 fad2基因的 ihpRNA 表达载体 pCN F IRno s。限制性内切酶酶切对载体作了鉴定分析 。 关键词 : 甘蓝型油菜 ; fad2基因; ihpRNA 表达载体 中图分类号 : S565. 4 , Q943. 2　文献标志码 : A 　 文章编号 : 1007—9084 (2006) 03—0251—06 　　菜籽油的一个特点是多不饱和脂肪酸如亚油酸 RNA 基因沉默技术曾被 SC IENCE 杂志评选为 ( ) ( ) 2002 年度的最重大科学进步 。RNA 介导的基因沉 18 ∶2 和亚麻酸 18 ∶3 含量较高 ,尽管二者都是 人体所必须的脂肪酸 ,但其化学性质都很不稳定 ,易 默在植物中被称作为转录后基因沉默 ,是双链 RNA 被氧化 ,产生对人体有害的物质 。与亚油酸 、亚麻酸 诱导细胞内同源 mRNA 降解进而导致基因沉默的 ( ) 过程 。新近的研究发现双链 RNA 不仅能专一性地 不同 ,油酸 18 ∶1 相对比较稳定 ,而且具有降低血 液胆固醇含量的特性 。流行病学研究曾发现一些地 引导 mRNA 的特异性降解 ,而且能诱导同源的 DNA 中海地区国家的居民长寿 ,心血管病和乳腺癌发病 序列甲基化 。在植物体内表达特定基因序列的双链 RNA 分子 ,可以抑制或降低某些特定基因的表达 。 ( ) 率较低 ,这与人们普遍食用富含油酸 18 ∶1 的橄 [ 1 ] 研究发现 ,带有柄环结构的双链 RNA ( hpRNA 或 ih 榄油密切相关 。因此 , 降低食用菜籽油多不饱和