特异性抗体 制备技术教材编辑.pptVIP

混合 半抗原-载体连接方法2 戊二醛法: 半抗原-NH2 载体蛋白-NH2 半抗原-N=CH-(CH2)3-CH=NH-载体蛋白 OHC-(CH2)3-CHO *戊二醛是常用的带有两个活性基团的双 功能联接剂 半抗原-载体连接方法3 氯甲酸异丁脂法： 半抗原-COOH 载体蛋白-NH2 Cl-COO-CH2CH(CH3)2 半抗原-COO-COO-CH2CH(CH3)2 半抗原-CO-NH-载体蛋白 简便，用于类固醇抗原制备 HO-CH2CH(CH3)2 ＋ 半抗原-载体连接方法4 琥珀酸酐法：用于不含羧基衍生物半抗原制备 半抗原-CH2OH CH2-CO CH2-CO 带羧基的半抗原琥珀酸衍生物 半抗原-CH2-OOC-CH2-CH2-COOH 返回 吡啶 再经氯甲酸异丁脂法或碳化 二亚胺法制备载体半抗原 四、佐剂 * 概念：与抗原同时或预先注射于机体，能增 加机体免疫应答或改变免疫应答类型的物质。 条件：①增加抗原的表面积； ②改变抗原的活性基团构型； ③佐剂与抗原混合能延长抗原在局部 组织的存留时间； ④可直接或间接激活免疫活性细胞； ⑤无毒性或无副作用。 （二）常用佐剂的种类和制备 1.氢氧化铝佐剂： 5%硫酸铝 5%氢氧化钠 氢氧化铝沉淀 制成悬液 即为佐剂 强烈搅拌 NS洗 二次 NS 等体积抗原 免疫接种 免疫原和抗血清制备技术 第一节 免疫原的制备 第二节 免疫血清的制备 第三节 抗体的纯化和鉴定 绵羊红细胞的制备流程图 摇动 15-20min 4℃ 可保存3周 取适量 NS洗涤3次 2000r/min 10min NS稀释至 2～5% 细菌细胞抗原的制备流程图 液体培养或 斜面培养 37℃24h 100℃水浴 2～2.5h 杀菌 无菌试验 NS稀释成8～10亿/ml O菌体抗原 返回 来源: 组织和细胞，其成分比较复杂。 1.组织和细胞成分混合抗原制备 2.蛋白质抗原制备 3.核酸抗原制备 4.类脂多糖抗原制备 5.免疫球蛋白片段制备 6.纯化抗原的鉴定 二、可溶性抗原制备及鉴定 可溶性抗原:蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、 补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸 返回 细胞破碎技术及评价 1.酶处理法 2.冻融法 3.超声破碎法 4.表面活性剂处理 常用酶类：溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶等 1.酶处理法 方法：在一定的条件下，能消化细菌和 组织细胞。 特点：①此法适用多种微生物； ②具有作用条件温和； 　　　 ③内含物成分不易受到破坏； ④细胞壁损坏的程度可以控制。 2.冻融法 原理：因突然冷冻，细胞内冰晶的形成及 胞内外溶剂浓度的突然改变而破坏细胞。 完 方法：将待破碎的细胞置冰箱内冻结，然 后缓慢融化，如此反复两次，大部分组织 细胞及细胞内的颗粒可被融破。 特点：此法适用于组织细胞，对微生物细 胞作用较差。 3.超声破碎法 原理：利用超声波的机械振动而使细胞破碎。 由于超声波发生空化作用（cavitation）使得 液体形成局部减压引起液体内部发生流动，漩涡生成与消失时，产生很大的压力，使细胞破碎。超声波使用的频率从1kHz～20kHz不等，间歇进行，避免长期超声产热，导致抗原破坏。 特点：①操作简单，重复性较好，节省时间； ②多用于微生物和组织细胞的破碎。 4.表面活性剂处理 原理：在适当的温度、pH及低离子强度的条 件下，表面活性剂能与脂蛋白形成微泡， 使膜的渗透性改变或使之溶解。 常用的有：十二烷基硫酸钠(SDS,阴离子型)、 二乙胺十六烷基溴（阳离子型）、聚山梨酯 （非离子型）、新洁尔灭等。 应用：①破碎细菌，且作用比较温和； ②提取核酸时，常用此法破碎细胞。 蛋白质抗原制备 蛋白质是良好的抗原，要制备特异性高 的抗血清通常需要纯化。可采用： 1.超速离心法 2.选择性沉淀法 3.凝胶层析法 4.离子交换层析法 5.亲合层析法 1．超速离心法 原理:利用各颗粒在梯度液中沉降速度不同， 使具有不同沉降速度的颗粒,处于不同密