分子克隆解析.pptVIP

将外源（某载体上的水稻）DNA片段亚克隆到另一载体上。;pU1301;pU1301+1.5KB外源;pUC19;两种载体的抽提 琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量 两种载体的限制性内切酶消化 目的片段的回收及亚克隆载体的去磷酸化 载体与外源DNA的连接 感受态细胞的制备 连接子转化感受态细胞 重组子筛选及鉴定;质粒载体的提取;是一个复制子，载体在受体细胞中能大量繁殖，其携带的外源基因才能在受体细胞中得到大量扩增； 有1到多个限制内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入； 具有选择性的遗传标记(如抗生素抗性标记等)，以此知道它是否已进入受体细胞，并据此标记将携带载体的细胞从其他细胞中分离出来。;;双链闭合环状DNA分子，具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它所携带的遗传信息。它可独立游离于细胞质中，也可整合到细菌染色体上。 质???在细胞内的复制可分为严谨型（只在细胞周期的一定阶段进行复制，一个细胞内只有1至几个拷贝）和松弛型（细胞周期中随时可以复制，拷贝数较多，一般在细胞内有20个以上）。;碱裂解法，主要包括4个步骤： 细菌的培养：从平板上挑取单菌落接种于含相应抗生素的培养基中，培养至对数生长后期； 菌体的收集和裂解：通过离心收集菌体，NaOH/SDS处理裂解细胞； 染色体DNA 、RNA 及其它杂质的去除：碱处理后用冰冷的KAC 缓冲液处理后