灰树花多糖的免疫活性及其对禽流感H5N1亚型疫苗预防作用的影响-食品科学与工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 灰树花多糖的免疫活性及其对禽流感 H5N1 亚型疫苗预防作用 的影响 摘 要 灰树花（Grifola frondosa）是担子菌亚门、层菌纲、无隔担子菌亚纲、非褶菌 目、多孔菌属中的一种大型药食兼用菌，又名贝叶多孔菌、云蕈、舞茸。其子实 体内富含多糖、氨基酸、微量元素等多种营养成分。诸多研究证明，灰树花含有 的多糖具有调节机体免疫力、抗病毒、抗肿瘤、治疗糖尿病、改善体内脂肪代谢 及抗氧化等多种生物学功效。本文通过对灰树花子实体多糖进行分离、纯化，对 所得的几种多糖组分进行了结构的初步分析和对巨噬细胞的活化作用。同时将灰 树花组分作为北京油鸡饲料添加料，通过对分组北京油鸡饲喂含有不同比例灰树 花组分的饲料，观察注射 H5N1 亚型灭活疫苗的北京油鸡组与未注射疫苗组在免 疫指标方面的差别及对生产性能的影响，研究灰树花组分对 H5N1 亚型灭活疫苗 预防作用效果的影响。 第一部分，灰树花子实体多糖的提取、分离和纯化。通过采用热水提取、乙醇 分级沉淀法获得灰树花子实体粗多糖 GFP20、GFP60 和 GFP80 三个组分，并针对 GFP20 进行进一步地分离、纯化。利用 DEAE-Sepharose Fast Flow 离子柱层析对粗 多糖 GFP20 进行纯化，利用盐相梯度洗脱方法，得到 GFP20-A 和 GFP20-B 两个 灰树花多糖组分，再将得到的两个粗多糖组分进行 Sephacryl S-500 凝胶柱层析， 得到四个灰树花多糖组分，即 GFP20-A1、GFP20-A2、GFP20-B1 和 GFP20-B2。 利用 HPLC 对四个灰树花多糖组分进行纯度检测，结果显示所得的四个灰树花多 糖均为均一多糖。 第二部分，灰树花多糖的体外免疫活性及抗肿瘤活性研究。利用巨噬细胞 RAW264.7 分泌 NO 的试验对分离得到的灰树花多糖组分进行了免疫活性的测定。 I 粗多糖 GFP20-A 与 GFP20-B 经过刺激体外培养的巨噬细胞 RAW264.7 分泌 NO 试 验证明两种粗多糖均有一定的体外免疫活性，经过 DEAE Sepharose Fast Flow 对两 种粗多糖分离得到的四种均一多糖的体外免疫活性试验证明，GFP20-A2 的体外免 疫活性大于 GFP20-A，GFP20-B2 的活性大于 GFP20-B，说明均一多糖的体外免疫 活性要高于粗多糖。且根据液相测定分子量的结果，表明分子量较大的均一多糖 具有更好的体外免疫活性，根据相关文献可知是因为分子量大的多糖具有更为复 杂的立体结构，生物学活性也更好。利用人肝癌细胞 HepG2 对分离得到的四种多 糖进行体外培养癌细胞增殖抑制试验，结果表明四种灰树花多糖对 HepG2 细胞均 无有效的增值抑制作用，不能直接诱导 HepG2 细胞的凋亡，也从侧面说明了灰树 花多糖的抗癌活性是通过在体内刺激机体的其他作用（如免疫力）而导致癌细胞 在体内凋亡。 第三部分，灰树花多糖的体内免疫活性及其对禽流感 H5N1 亚型灭活疫苗预防 作用的影响。根据前两部分针对灰树花多糖在体外免疫活性的探讨，本章研究了 灰树花多糖在北京油鸡体内的免疫学活性，并针对灰树花多糖对禽流感 H5N1 亚 型灭活疫苗预防效果的影响进行了研究。首先对北京油鸡外周血液中 H5 亚型抗体 含量进行了测定，结果表明灰树花多糖能有效提高机体内 H5 亚型抗体的含量，并 且其含量与饲料中添加的灰树花组分呈正比，促进机体的体液免疫功能。灰树花 多糖还能够增强北京油鸡体内巨噬细胞的吞噬活性，且添加灰树花的量与巨噬细 胞的吞噬活性呈正比，促进非特异性免疫发挥作用。同时灰树花多糖对 T 细胞的 作用因子 CD3、CD4 和 CD8 有着较好的分泌促进效果，可以增强动物机体的细胞 免疫。对生产性能也具有一定的促进作用，但疫苗注射组相比于未注射组的生产 性能较低，推测其原因可能是注射的疫苗对油鸡本身的生长造成了一些影响，也 有可能是因为注射疫苗的过程中给油鸡造成的应激影响过大，对其短时间内的采 食和生长造成了影响。但根据所有的数据可以说明灰树花多糖对 H5N1 亚型灭活 疫苗的免疫效果有较好的促进作用，可以通过多种途径激活免疫系统，促进动物 免疫能力的提升，是一种十分有潜力的可以促进机体免疫能力的动物饲料添加剂。 关键词：灰树花多糖，分离纯化，免疫活性，禽流感 H5N1 亚型灭活疫苗，生 产性能 II The Immunobiological Activity of Polysaccharide of Grifola frondosa and Its Effect to H5N1 Vaccine Preventive Effect ABSTRACT Grifola frondosa is a large d