黄体酮促进脑出血小鼠远期神经功能恢复 的机制研究-神经病学专业论文.docxVIP

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原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者:日期:年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者:日期:年月日黄体酮促进脑出血小鼠远期神经功能恢复的机制研究研究生 左方芳 导师 蒋超郑州大学第五附属医院神经内科 河南郑州4500052摘要背景和目的脑出血为常见脑血管病。其具有高致残率、高死亡率的特点,并缺乏有效 的治疗措施日益危害人类健康,为医学界所关注。既往其它神经系统疾病的研 究已经证实黄体酮具有抗凋亡、抗自由基、抗炎、减轻神经兴奋毒性、减轻脑 水肿、促进髓鞘再生与神经发生的作用。然而,目前尚未见到黄体酮治疗脑出 血的研究报道。为发现脑出血有效的治疗手段及可能的治疗靶点,本项目拟研 究黄体酮对脑出血小鼠的神经保护作用及对远期神经功能的影响。方法1.实验动物与分组:清洁级成年雄性 C57BL/6 小鼠(体质量 25-35g,n=130), 按照随机数字表法分为 3 组:(1)假手术(Sham-operated group,n=40),术中仅切 开头皮并缝合;(2)溶剂治疗组(vehicle-treated ICH group,n=45),于脑出血成模 后给予腹腔注射 22.5% 羟丙基- β-环糊精(HBC)溶液;(3) 黄体酮治疗组 (progesterone-treated group,n=45),于脑出血成模后给予腹腔注射黄体酮溶液。 2.小鼠脑出血模型:采用胶原酶尾状核立体定位注射法建立小鼠脑出血模型。小鼠的尾状核定位于前囟左 2.2mm,前囟前 0.8mm,进针深度为 2.9mm 处。3.黄体酮溶液的配制及注射:将黄体酮粉末溶于 22.5%羟丙基-β-环糊精 (HBC)溶液中。黄体酮治疗组于脑出血后 1 h 腹腔注射黄体酮溶液(8mg/kg),I并分别于脑出血后 6、24、48h 皮下注射黄体酮溶液;溶剂治疗组在相同时间点给予等体积的 HBC 治疗。4.实验观察指标:(1)早期组织病理学与形态学指标:①Ibal-1、MPO、GFAP 免疫荧光染色 检测脑出血后 3d 血肿周围活化的小胶质细胞、单核细胞的形态与数量及活化的 星形胶质细胞的荧光强度;FJB 免疫荧光染色检测脑出血后 3d 血肿周围变性的 神经元;②Luxol fast blue /Cresyl Violet 染色检测脑出血后 3d 血肿体积大小,脑 肿胀程度;③干湿重法检测脑出血后 3d 时两侧大脑半球及小脑的含水量。(2)分子生物学指标:①细胞因子的检测:应用 Western blot 技术检测脑 出血后 1d 时 COX-1、COX-2、HMGB1、IL-1β、VEGF 在血肿侧大脑半球的 表达;②金属基质蛋白酶的检测:运用 Gelatin Zymography(明胶酶谱法)检测 脑出血后 1d 时出血侧大脑半球 MMP-2 与 MMP-9 的活性;⑶氧化应激反应的 检测:于脑出血术后 12h 应用 oxyblot 评价出血侧大脑半球蛋白羟基化程度,并 用 Western blot 技术检测 nitrotyrosine 的水平评价出血侧大脑半球蛋白硝基化程 度;④Na+-K+-ATP 酶表达水平的检测:应用 Western blot 技术检测脑出血后 1d 时 Na-K-ATPase Ser23 (NKA Ser23) 、 Na-KATPase Ser943(NKA Ser943) 、 Na-K-ATPaseα1(NKA-α1) 、Na-K-ATPaseα3(NKA-α3)在血肿侧大脑半球的 表达。(3)远期组织病理学及行为学评价:于脑出血后 28d 应用 GFAP 免疫荧光 染色技术检测出血侧周围胶质瘢痕的厚度,Luxol fast blue /Cresyl Violet 染色评 价脑白质损伤情况、脑萎缩程度、残留脑损伤体积。分别于脑出血后 1、3、7、 14、21、28d 应用 24 分神经功能评分系统评价神经功能的变化,并在该过程中 记录肛温、体质量。5.统计学

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