脊髓损伤动物模型的制作-外科学专业论文.docxVIP

方 方 法 成年雌性Sprague--Dawley太鼠30只、体重200—3009、平均 2559。随机分为3组：对照组(N=10)，脊髓半损伤组(N=10)， 脊髓全损伤组(N=10)。手术过程中，对所有实验大鼠使用同一 把自制的2mm切割刀具，以确保脊髓损伤标准一致。同时，脊髓 半损伤组的损伤侧随机确定，避免由于术者手术习惯产生误差。 分别于术后第一周内每日、第2、3、4、5、6、7、8周等14个时间点， 将各组实验动物置于平面场地爬行，按照BBB评分标准观察、分 别记录动物双后肢运动功能恢复情况。由于大鼠昼夜活动差异， 所有观察均在晚8时进行。术后8周取两种模型中BBB评分接 近平均得分的大鼠各一只，过量麻醉处死动物，4％多聚甲醛常规 灌注固定，取材置于30％蔗糖溶液中4C脱水过夜，恒冷箱连续矢 状切片(20／止M)，Hematoxin／eosin(HE)染色。光镜下观察脊髓 组织形态学变化。实验记录了脊髓全横断切除组、单纯椎板磨除 的对照组在术后不同时间左、右两侧肢体的运动功能恢复情况和 脊髓半横断切除组在术后不同时间损伤侧和损伤对侧的运动功能 恢复情况，进行BBB评分，得到6组BBB评分结果。使用Kolmog- OIOV—Smimov方法检验所得数据的分步特性，结果显示术后任何 时间点各组的BBB数值符合近似正态分布；在此基础上，对术后 不同时间点各组的BBB数值，使用ANOVA方法进行统计分析： 一．以BBB为观察值，探讨各组间，不同观察时间两个因素，其均 数的差异是否有显著差别(Univariate Analysis of Variance)；如果 有则进一步进行SNK Student—Newman—Keuls Multiple Range检 验(q检验)将6组的BBB评分两两分别比较；二，各个数据组中， 不同观察时问BBB是否有显著差异(One—Way—ANOVA)；如果 有则SNK Student—Newman—Keuls Multiple Range检验(q检 验)将各个观察时间BBB两两分别比较，并作图，观察出脊髓功能 ·2· 随时间的变化情况。结 随时间的变化情况。 结 果 6组BBB评分结果Univariate Analysis of Variance分析有显著 性差异；同时，除全横断摸型、对照组组左侧BBB评分和右侧BBB 评分之f可元显著性差异外，其余各组间存在显著差异。脊髓半横 断切除实验组的损伤侧BBB，术后l、2、3、4、5、6周各个相临观察 点之间BBB有显著差异，术后1周内和术后6周以后各个相I临观 察点之间BBB无显著差异。脊髓半横断切除实验组的损伤对侧 BBB，术后1、2、3、4、5周各个相临观察点之间BBB有显著差异，术 后I周内和术后5周以后各个相临观察点之间BBB无显著差异。 脊髓全横断损伤组和对照组左右两侧肢体BBB，术后8周内各个 相临观察点之间无显著性差异。组织形态学：8周实验动物脊髓 组织切片，HE染色示：脊髓半损伤组损伤对侧可见少量白质残 留，损伤范围扩大，越过中线，损伤侧无神经纤维残留；脊髓全损伤 组于损伤全长未见脊髓组织残留，同时损伤头侧和尾侧可见胶质 瘢痕，且损伤长度增加。1， 7 讨 论 本实验中采用磨钻磨除棘突和榷板。尽可能减少暴露脊髓过 程中对脊髓的损伤。实验结果证明，仅行椎板磨除的对照组实验 动物术后无一例出现脊髓功能障碍。实验中使用了剃须刀片自制 的长度2ram?的切割刀，脊髓切除时，确保切割长度和切割范围 恒定，不但将脊髓损伤标准化；而且，切割刀在手术过程中并不抽 出，延长的刀身具有脊髓压板的作用，即能充分暴露椎管内组织， 还能在使用负压吸引器的过程中保护对侧脊髓组织；同时，由于刀 身的保护作用，术者不用顾及误伤对侧脊髓，能够全心注意损伤侧 脊髓是否残留，保证了脊髓组织切除确切。参照神经外科手术 ·3· KUSA的使用方法，使用负压吸引器将脊髓组织分块吸除，尽可能 KUSA的使用方法，使用负压吸引器将脊髓组织分块吸除，尽可能 减少了半横断切除脊髓模型制作过程中对损伤对侧脊髓组织的损 伤。术后采用膀胱按摩、青霉素肌注、尾部悬吊的方法减少了术后 实验动物的死亡率和肢体畸形率。采用BBB评价实验动物双下 肢运动功能的细微恢复。统计学和组织学结果表明，该动物模型 将半损伤模型对侧代偿作用减少到最少，同时避免了全损伤模型 脊髓组织残留的可能。达到了脊髓功能的确切缺失。属于脊髓损 伤的理想化模型。 关键词脊髓损伤；动物模型；BBB评分 ·4· Functional Functional deficits following SCI result fromdamage tO or sever- ance of axons，loss of neurons an