活性蛋白质的分离与应用.pptVIP

3.根据电荷不同的分离方法 （3）毛细管凝胶电泳 毛细管凝胶电泳，在毛细管中装入单体，引发聚合形成凝胶，主要用于测定蛋白质、DNA等大分子化合物。另有将聚合物溶液等具有筛分作用的物质，如葡聚糖、聚环氧乙烷，装入毛细管中进行分析，称毛细管无胶筛分电泳，故有时将此种模式总称为毛细管筛分电泳，下分为凝胶和无胶筛分两类。 CGE是基于分子筛原理，经十二烷基磺酸钠（SDS）处理的蛋白或多肽在电泳过程中因分子形状、相对分子质量不同而分离。 3.根据电荷不同的分离方法 （4）胶束电动毛细管层析 胶束电动毛细管色谱，在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷基硫酸钠，形成胶束，被分离物质在水相和胶束相(准固定相)之间发生分配并随电渗流在毛细管内迁移，达到分离。本模式能用于中性物质的分离。 MECC的原理是在电泳液中加入表面活性剂，如SDS，使一些中性分子、带相同电荷分子得以分离。特别是对一些小分子肽，阴离子、阳离子表面活性剂的应用都可以使之形成带有一定电荷的胶束，从而得到很好的分离效果。有文献报道在电解液中加入环糊精等物质，可使含疏水结构组分的多肽选择与环糊精的环孔作用，从而利用疏水作用食多肽得到分离。 3.根据电荷不同的分离方法 用离子交换层析分离蛋白质也是根据其带电荷的情况。常用于蛋白质分离的离子交换剂有弱酸性的羟甲基纤维素和弱碱性的二乙基氨基乙基纤维素，前者为阳离子交换剂，后者为阴离子交换剂。若将离子交换与凝胶过滤相结合，效果更佳。 蛋白质对离子交换剂的结合力取决于彼此间相反电荷的静电吸引，这与溶液的pH有关，因为pH决定离子交换剂与蛋白质的电离程度。盐类的存在可以降低离子交换剂的离子基团和蛋白质的相反电荷基团之间的静电吸引。因此，蛋白质混合物的分离可用改变溶液中盐类离子强度（加盐梯度洗脱）和pH来完成。对离子交换剂结合力最小的蛋白质，首先由层析柱中洗脱出来。 4.蛋白质的选择吸附 某些物质，例如极性的硅胶和氧化铝以及非极性的活性炭等粉末具有吸附能力，能够将其他种类的分子吸附在其粉末颗粒的表面，而吸附力又因被吸附的物质性质不同而异，吸附层析法就是利用这种吸附力的强弱不同达到分离的目的。对蛋白质分子与各种吸附剂结合的真实性知道得还很少，但认为与非极性吸附剂作用可能主要是靠范德华力和疏水作用；而与极性吸附剂作用的主要作用力，可能是离子吸引和氢键连接的力。 蛋白质提纯中使用最广泛和最有效的吸附剂是结晶磷酸钙，即羟基磷灰石。据推测，蛋白质分子中带负电荷的基团是与羟基磷灰石晶体的钙离子结合。蛋白质可用磷酸缓冲液从羟基磷灰石柱上洗脱下来。 蛋白质分离纯化的方法 概述 活性蛋白质的理化性质 活性蛋白质的分离 实例 主要内容 主要内容 概述 蛋白质是一类由多种氨基酸结合而成的长链含氮有机高分子化合物，是生物体细胞的重要组成物质之一，是生命活动的基础。 活性蛋白质是一类具有特殊生理活性的蛋白质。 概述 活性蛋白质的存在范围： 活性蛋白质广泛分布于各种生物体组织，如动植物组织、动物乳汁、植物种子等中。 蛋白质的分类 活性蛋白质的种类非常多，一般根据来源与特性可分为：活性多肽、活性乳蛋白、天花粉蛋白、谷物蛋白、豆类蛋白、花生蛋白等。 蛋白质又可以根据蛋白质分子的化学组成和结构复杂程度分类，将其分为单纯蛋白质和结合蛋白质。单纯蛋白质是指结构比较简单，在组成上基本是单纯由氨基酸构成的那些蛋白质。结合蛋白质是指结构比较复杂，由氨基酸和其他成分组成的那些蛋白质。单纯蛋白质又可以根据溶解度细分为清蛋白、球蛋白、谷蛋白、硬蛋白、组蛋白、精蛋白、醇溶谷蛋白等。 活性蛋白质的性质 活性蛋白质是蛋白质中一类具有生物活性的蛋白质，像蛋白质一样，也是一类由多种氨基酸结合而成的长链高分子化合物，它具有所有蛋白质的一般性质，包括： 两性解离 等电点 胶体性质 变性 沉淀 显色反应 活性蛋白质的性质 1.两性解离： 蛋白质分子中含有多个可解离的酸性或碱性基团（酸性基团主要是C末端羧基及酸性氨基酸侧链的羧基，碱性基团有N末端的氨基及碱性氨基酸侧链的氨基、胍基及咪基）。可进行酸性解离或碱性解离，所以说它具有两性解离的特性。 活性蛋白质的性质 2.蛋白质的等电点： 在一定的介质中，某一蛋白质解离成阴、阳离子的趋势相等，成为两性离子（净电荷为零），此时介质的pH值为蛋白质的等电点。不同的蛋白质所含酸性或碱性氨基酸的比例不同，等电点也不相同。根据蛋白质等电点的不同可以通过电泳进行分离蛋白质。 活性蛋白质的性质 3.蛋白质的胶体性质： 蛋白质属亲水胶体分子，如球状蛋白质相对分子质量在6000~100万之间，直径在胶体颗粒的范围（1~100nm），且球蛋白质溶于水，分子中的亲水氨基酸残基多位于颗粒表面，在水溶液中能与水起水合作用。所以蛋白质具有胶体性质，如丁达尔现象、布朗运动、不能透过半透膜等。