环氧合酶-2在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义-妇产科学专业论文.docxVIP

中文摘要刖 中文摘要 刖 置 I子宫内膜癌是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一，约占女 性癌症总数的7％，占女性生殖道恶性肿瘤的20％一30％。近年 来其发病率在世界范围内呈持续上升趋势，是威胁妇女生命的一 个主要疾病。因此，子宫内膜癌的病因学研究及寻找早期诊断和 有效治疗子宫内膜癌的方法一直是学者们研究的热点。随着分子 生物学技术的飞速发展，癌基因、抑癌基因及相关物质异常被认为 是正常组织癌变并导致生物学行为一系列改变的基本原因。流行 病学的研究表明，服用非甾体类抗炎药可使结肠癌的发生率降低 40％～50％。其原因很可能与该药对环氧合酶(COX)的抑制作 用有关。COX是一种膜结合蛋白，是前列腺素生物合成的限速 酶。目前发现人类基因至少含有COX的两种基因编码，即COX— l和COX一2。COX一2是早表达基因，它被细胞因子、生长因子、 丝裂原等迅速诱导产生，在炎症和肿瘤中起重要作用。越来越多 的研究表明，在结直肠癌、食管癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、膀胱癌等多 种上皮性肿瘤中，都有COX一2表达的异常增高，但有关COX一2 在子宫内膜癌组织中的表达及其与子宫内膜癌临床病理特征关系 的研究尚未见报道。7为确定COX一2与子宫内膜癌发生、发展的 关系，本研究采用半定量逆转录聚合酶链反应(1it—PCR)法对32 例子宫内膜癌，10例不典型增生子宫内膜和10例正常子宫内膜 组织中COX一2 mRNA水平进行检测。 ．／资料与方法 1．资料来源 取2000年3月一2002年3月于中国医科大学第一、第二临床 学院妇科刮宫或手术切除的新鲜组织标本52例，分为3组：(1) 学院妇科刮宫或手术切除的新鲜组织标本52例，分为3组：(1) 子宫内膜癌组32例；(2)不典型增生子宫内膜组10例；(3)正常 子宫内膜组10例。所有病例均为初治病例，平均年龄53．7岁。 部分标本经福尔马林固定，进行常规HE染色，请二位病理专家阅 片，按国际妇产联盟(FIGO)1988年修订的标准确定病理学诊断、 组织学类型和组织学分级。其余标本置液氮中冷冻，然后送于一 70℃冰箱中保存。子宫内膜癌组均有完整的临床病理资料，其中 内膜样腺癌22例，腺角化癌7例，透明细胞癌3例；手术一病理分 期I期18例，Ⅱ期9例，Ⅲ期5例；组织学分级G，级14例，G：级 10例，G，级8例；伴深肌层浸润12例；伴淋巴结转移5例；腹腔液 细胞学检查阳性4例。 2．主要试剂 COX一2及内参照引物均由北京奥科生物有限责任公司合 成；提取总RNA的TRIzol试剂由美国Promega公司提供；逆转录 和PCR扩增所需的酶及其它试剂由日本TaKaRa公司提供；电泳 用琼脂糖由沈阳联星生物公司提供。 3．方法 (1)总RNA提取：采用TRIzol一步抽提法。RNA纯度采用紫 外透射仪测定OD值，O!)260／280值为1．6—2．0。 (2)逆转录合成eDNA：在10“反应体系中分别加入样本 RNA 1山以90℃孵育3min，42℃30min合成eDNA。 (3)PCR扩增和产物分析：在PCR反应体系中将eDNA产物 及引物在95。C90s预变性，94℃90s变性，55℃45s退火，72℃90s 复性，进行35个循环后，72℃10rain延伸。另一反应体系中同时 扩增B—actin作为内对照。将PER扩增产物用2％琼脂糖凝胶电 泳检测，溴乙锭染色分析，紫外灯下拍照，电泳凝胶成像及自动分 析系统摄像、并检测各扩增带的产物含量。中X174一nine lI DNA Marker为分子量标准。每次实验均设阳性及空白对照。 ·2· 4．结果判断：EB显色后，与Marker相比较有305bp条带及内 4．结果判断：EB显色后，与Marker相比较有305bp条带及内 对照690bp条带显示者判断为阳性，仅有内对照690bp条带显示 者判断为阴性。用内对照吸光度值标化COX一2吸光度值，得到 COX一2的相对含量，具体计算公式如下：COX一2相对含量= (COX一2密度／13一actin密度)X 100。 5．统计学处理：采用SPSS软件进行统计学处理。表达率采 用Fisher’s精确概率法和X2检验；相对含量采用方差分析和t检 验。 结 果 1．COX一2mRNA在子宫内膜癌、不典型增生子宫内膜及正常 子宫内膜组织中的表达：三种组织中都有COX～2 mRNA的表达， 在子宫内膜癌和不典型增生子宫内膜组织中，COX一2 mRNA表 达率高于正常子宫内膜组织，经Fisher’s精确概率法检验，有显著 性差异(P0．05)，而两者问表达率比较，差异元显著性(P0． 05)；COX一2 mRNA在三种组织中的相对含量经方差分析，差异 非常显著(P0．01)，两两比较经Q检验，亦有显著性差异(P0． 叭)。 2