常见病原微生物的检测PPT讲义课件.pptVIP

第六章食物传播的病原微生物及其检验; 兔血浆制备:无菌采取兔心脏血,以1份灭菌的3.8%枸橼酸钠液抗凝剂加4份兔血的比例充分混匀,离心,吸取上清液即为原兔血浆,分装成1ml/支或0.5ml/支; 另用灭菌生理盐水稀释兔血浆,制成4倍稀释血浆(以下简称为稀释兔血浆),分装同上,于-18℃以下冰冻保存,供试验;第一节 炭疽杆菌（一）;2.在活体或未经解剖的尸体内，则不能形成芽胞。芽胞呈椭圆形，位于菌体中央，其宽度小于菌体的宽度。 3.形成荚膜是毒性特征。 4.炭疽杆菌受低浓度青霉素作用，菌体可肿大形成园珠，称为“串珠反应”。这也是炭疽杆菌特有的反应。 ;1.本菌专性需氧或兼性厌氧，在普通培养基中易繁殖。 2.最适温度为37℃，最适pH为7.2～7.4 3.在琼脂平板培养24小时，粗糙菌落。菌落呈毛玻璃状，边缘不整齐，呈卷发状，有一个或数个小尾突起，这是本菌向外伸延繁殖所致。;4.在5～10%绵羊??液琼脂平板上，菌落周围无明显的溶血环，但培养较久后可出现轻度溶血。菌落有粘性，用接种针钩取可拉成丝，称为“拉丝”现象。 5.在普通肉汤培养18～24小时，管底有絮状沉淀生长，无菌膜，菌液清亮。有毒株在碳酸氢钠平板，20%CO2培养下，形成粘液状菌落（有荚膜），而无毒株则为粗糙状。 ;（三）抵抗力 繁殖体抵抗力不强，易被一般消毒剂杀灭，而芽胞抵抗力强，在干燥的室温环境中可存活数十年，在皮毛中可存活数年。牧场一旦被污染，芽胞可存活数年至数十年。煮沸10分钟或干热140℃3小时可将芽胞杀死。炭疽芽胞对碘特别敏感，对青霉素、链霉素、卡那霉素等高度敏感。 ;一）致病性 人类主要通过工农业生产而感染。机体抵抗力降低时，接触污染物品可发生下列疾病： 1．皮肤炭疽，最常见，多发生于屠宰或毛刷工人及饲养员。 2．纵隔障炭疽， 少见。由吸入病菌芽胞所致，多发生于皮毛工人，病死率高。病初似感冒，进而出现严重的支气管肺炎，可在2～3天内死于中毒性休克。;3．肠炭疽， 由食入病兽肉制品所致，以全身中毒症状为主，并有胃肠道溃疡、出血及毒血症，发病后2～3日内死亡。 上述疾病若引起败血症时，可继发“炭疽性脑膜炎”。炭疽杆菌的致病性取决于荚膜和毒素的协同作用。 ;（二）免疫性 注射炭疽外毒素中保护性抗原于机体，能形成抗毒素免疫，对受染炭疽有保护作用。但单纯的荚膜抗体对机体没有保护作用。病后可获较强的免疫力。 ;三、微生物学检查;3.确诊应进行血平板分离培养，37℃孵育12～15小时，钩取可疑菌落，进行青霉素串珠试验，噬菌体裂解试验，碳酸氢钠平板二氧化碳培养。荚膜肿胀试验和小白鼠致病力试验等与其他需氧芽胞杆菌进行鉴别确定。;四、特异防治;五、检测方法;第一节 布鲁氏杆菌（二）;本菌为严格需氧菌； 牛布氏杆菌在初次分离时，需在5～10%CO2环境中才能生长，最适温度37℃，最适的pH6.6～7.1，营养要求高，生长时需硫胺素，烟草酸和生物素，泛酸钙等，实验室常用肝浸液培养基或改良厚氏培养基。 此菌生缓慢，培养48小时后才出现透明的小菌落，鸡胚培养也能生长。 　; 在自然界中抵抗力较强，在病畜的脏器和分泌物中，一般能存活4个月左右，在食品中约能生存2个月。对低温的抵抗力也强，对热和消毒剂抵抗力弱。对链霉素、氯霉素和四环素等均敏感。 　;本菌侵入人体后，被吞噬细胞吞噬，由于本菌具有荚膜，能抵抗吞噬细胞的吞噬消毁，并能在该细胞内增殖。反复出现菌血症。由于内毒素的作用，病人出现发热、无力等中毒症状，血流中细菌逐步消失，体温也逐渐消退。细菌在细胞内繁殖至一定程度时，再次进入血流又出现菌血症，体温再次上升，反复呈波浪热型。 ; 人感染布氏杆菌表现乏力，全身软弱，食欲不振，失眠，咳嗽，有白色痰，可听到肺部干鸣，多呈波浪热，也有稽留热、不规则热或不发热。 盗汗或大汗，一个或多个关节发生无红肿热的疼痛，肌肉酸痛，由于关节和肌肉疼痛难忍，即使不发烧也不能劳动，成为能吃不能活懒汉，故该病又被称作懒汉病。 病灶发生在生殖器官，影响生育，严重者可引起死亡。 ;　　本菌传染性大，要注意防止实验室污染。 （一）分离培养 急性期采集血液，慢性期采取骨髓，接种于双相肝浸液培养基（一半斜面，一半液体）置37℃10%CO2环境中培养，每隔2天检查一次，如无细菌生长则摇荡培养基，使液体浸过斜面上，有细菌生长，可依鉴定项目确定是否为布氏杆菌。经一月培养无细菌生长，可报告阴性。 　　;（二）血清学检查 　通常作凝集试验，判定凝集效价1：50可疑，1：100以上为阳性。效价增高4倍以上时，更有诊断价值。 （三）酶联免疫吸附检测;（四）PCR检测 此法敏感、特异、快速，实时荧光定量PCR已用于布氏杆菌特异性基因的检测，即在PCR反应体系中加荧光基团，利用荧光信