课件：结核病细菌学检验的标准化与新诊断技术进展.ppt

验证数据 产品 目的 材料 靶点 敏感性 专属性 对照方法 * GenoType? Mycobacterium CM 普通分支杆菌的鉴定 阳性的固体/液体培养物 DNA 97 % 93,5 % 测序； 生化技术 GenoType? Mycobacterium AS 其他菌种的鉴定 阳性的固体/液体培养物 DNA 96 % 94 % 测序； 生化技术 GenoType? MTBC 结核分支杆菌复合群的菌种区分 阳性的固体/液体培养物 DNA 100 % 100 % 生化技术； 分子遗传学方法 GenoType? MTBDRplus 结核分支杆菌复合群的鉴定及其对利福平和/或异烟肼的耐药性 直接采集的标本（显微镜检查阳性，经过纯化）；阳性的固体/液体培养物 DNA 直接采集的标本 RMP: 96,8 % INH: 90,2 % 固体/液体培养物 RMP: 98,7 % INH: 92 % 直接采集的标本 RMP: 95% INH: 100 % 固体/液体培养物 RMP: 100 % INH: 100 % 传统的药敏试验 (DST) GenoType? MTBDRsl 结核分支杆菌复合群的鉴定及其对氟喹诺酮类和/或氨基糖苷类/环肽和/或乙胺丁醇的耐药性 直接采集的标本（显微镜检查阳性，经过纯化）；阳性的固体/液体培养物 DNA 直接采集的标本 氧氟沙星： 88,9 % 阿米卡星/ 卷曲霉素： 75 % 乙胺丁醇： 38,5 % 固体/液体培养物** 氧氟沙星： 90,6 % 阿米卡星/ 卷曲霉素： 84,8 % 乙胺丁醇： 69,2 % 直接采集的标本 氧氟沙星： 100 % 阿米卡星/ 卷曲霉素： 100 % 乙胺丁醇： 100 % 固体/液体培养物 氧氟沙星： 100 % 阿米卡星/ 卷曲霉素： 100 % 乙胺丁醇： 100 % 传统的药敏试验 (DST) GenoType? Mycobacteria Direct 结核分支杆菌复合群鸟分支杆菌M. avium、胞内分支杆菌M. intracellulare、堪萨斯分支杆菌M. kansasii、玛尔摩分支杆菌 M. malmoense的鉴定 经纯化后的直接采集的标本 RNA 涂片阳性样本 97,5% 涂片阴性样本 83,3 % 涂片阳性样本 99 % 培养 结论 DNA-Strip技术系列涵盖了分枝杆菌菌种鉴定、TB-复合群的区分和药敏试验。 所有检测都采用通用试剂盒和相同的方案进行扩增和杂交。 所有检测均可在4-5小时内完成。 本法适用于大样本量的检测（每天检测数百份样品）。 （1.4）、基因芯片技术 科学的发展人类的进步要求进行大规模基因信息的解析 鉴于基因芯片的多种用途和其远大的发展前景，不少生命科学研究机构和生物技术公司都先后参与了这项技术的研究。据不完全统计目前仅国内就有十多家单位从事该技术的研究与开发工作，全世界估计至少有二三十家。它已象半导体技术一样成为一个重要的产业方向。当前已正被广泛地应用于诸多领域，包括生物医学、临床诊断学和基因组学研究。 什么是基因芯片 基因芯片指对数以千记的DNA片段同时进行处理分析的技术，诸如基因组DNA突变谱和mRNA表达谱的检测等（Trends in Biotechnology)。 该技术系指将大量探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。 基因芯片技术的主要特点 技术操作简单 自动化程高 序列数量大 检测效率高 应用范围广 成本相对低 博奥 分枝杆菌菌种鉴定试剂盒(DNA微阵列芯片法) 主要分为样品制备、芯片反应和结果判读三部分。 ?首先，将检测菌的DNA从培养、分离纯化的菌株或者直接从临床样品中提取出来； ?然后，对样品中的靶基因进行扩增和荧光标记； ?接着，将扩增并荧光标记的基因序列与芯片上的探针进行杂交反应； ?最后芯片扫描成像，用配套软件进行判读。 芯片扫描结果 1 临床验证 （1.5）GeneXpert MTB/RIF快速诊断技术 Cepheid? MTB/RIF: 可直接检测痰液，检测结核分支杆菌的同时，鉴定是否有利福平耐药性， 2小时出结果。 GeneXpert检测平台采用实时荧光定量PCR检测原理。 所有检测均无需提取核酸，手工操作时间不超过2分钟。 GeneXpert 最大程度简化TB检测！！！ 将痰液加入处理瓶，放置15分钟； 将处理后的样品加入样品反应盒； 将该盒子放置在GeneXpert中，轻松