第8章 动植物细胞的大规模培养.pptVIP

桨式和海船式搅拌器 桨式 海船式 图 8-3 桨式和海船式搅拌器的结构示意图 桨式搅拌器叶片与水平面角度为450。这种设计即便在低搅拌转速下也能达到均匀混合之目的。海船式搅拌器的3个叶片与水平面夹角为300，这是专为对剪切力非常敏感的动物细胞, 尤其是微载体培养系统而设计的。在低剪切力下这种搅拌器也能使微载体混合均匀, 从而克服微载体的絮凝作用。在相同转速下, 海船式搅拌器搅拌所产生的剪切力比桨式搅拌器低。 通气装置 防止动物细胞的破损是动物细胞大规模体外培养时生物反应器设计、开发的关键问题。大量研究结果表明, 无论是机械搅拌式生物反应器还是气流式生物反应器, 导致细胞损伤和破损的原因主要是气泡现象（搅拌时气体卷吸、气泡夹带及直接气体鼓泡）。在没有气泡存在时, 悬浮动物细胞能适应很高的机械搅拌强度。 生物反应器中细胞破损大致经历了如下三个过程：①细胞在气泡表面吸附；②气泡表面的细胞被气泡带入泡沫中；③细胞被气泡液膜因排液、聚并和破碎而产生的剪切力所破损或物理损失。 细胞死亡速率常数 式中f为修正系数；?为吸附系数, ；F为气体鼓泡速率；db为气泡直径；V为反应器体积。 降低气体鼓泡速率、增大气泡直径和反应器体积都能降低细胞的死亡速率。 A. 硅酮管无气泡通气系统 渗透性极佳的硅酮管。压缩空气由硅酮管慢慢渗透进入培养液中, 而不产生气泡，从而杜绝了气泡引起的细胞死亡现象。 B. 旋转滤器 图8-4 Spinfilter 结构示意图 具有一定孔径（20、40、75 ?m）的园筒形不锈钢过滤器。与搅拌轴连接在一起, 随搅拌器一起转动。气液交换发生在过滤器里面, 而细胞被截留在过滤器外面, 从而杜绝了气泡引起的细胞死亡现象。 C. 通气环及微孔分布器 通气环是基于细胞死亡速率与气泡直径成反比的原理而设计的。通气环上的孔径达到毫米级。但其氧传递速率是硅酮管无气泡系统的5倍, 因此以较低的通气速率即可满足细胞耗氧的要求, 从而降低细胞死亡速率。如当通气量为0.01～0.1 vvm时, 便可满足106 个/ml的细胞生长的耗氧要求。 微孔分布器是一种开有一定数量的微孔的不锈钢管, 孔径为1～200 ?m, 常用100 ?m。由于气泡比较小, 它只能使用在稍耐剪切的悬浮细胞的培养中。然而其KLa比通气环系统高，因此它非常适合耗氧量较高的动物细胞的培养。 2、气升式生物反应器 自1979年Katinger等首次报道应用气升式生物反应器成功地进行动物细胞悬浮培养以来，气升式生物反应器已被认为是动物细胞大规模培养的最理想的反应器。英国Celltech公司已用10000 L气升式生物反应器培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体 。 动物细胞大规模培养一般采用内循环式，但也有采用外循环式的。 设计的关键是空气分布器的设计。提高气体鼓泡速率和减小气泡直径尽管能提高传质比表面积(a)，进而提高体积溶氧系数(KLa)，但同时又会导致细胞死亡速率的提高。因此要求在满足细胞的传质要求的基础上，尽可能降低气体鼓泡速率和增大气泡直径。 因此，气升罐一般采用环形管，孔的设计要求控制的气速在0.01～0.06 vvm范围内，产生的气泡直径为1～20 mm，反应器的高径比一般为3:1～12:1。 3、中空纤维生物反应器(hollow fiber bioreactor) 结构 中空纤维反应器 平板式浅床中空纤维反应器 图8-5 中空纤维生物反应器 中空纤维生物反应器是一个特制的圆筒，内装着数千根中空纤维。根据中空纤维的排列方式又有传统式和平板式浅床中空纤维反应器2种，前者纤维纵向排列，存在浓度梯度；后者纤维置于浅床中，顶和底层床各有一个20 ?m微孔不锈钢烧结板分布器，防止排出培养液的返混 。 纤维为中空的细微管状结构，相当于毛细血管。外径一般为100～500 ?m，管壁厚度约50～75?m。管壁是极薄的半透膜，似海绵，富含毛细管。它能截留住分子量分别为1×104、5×104、10×104 道尔顿的三类物质。 材料有：纤维素（cellulose）、改性纤维素（modified cellulose）、醋酸纤维（cellulose acetate）、聚丙烯（polypropylene）、聚砜（polysulphone）、铜氨人造纤维（cuprammonium rayon）、聚甲基丙烯酸甲酯（polymethylmethacrylate）及其它聚合物。 工作原理 无气泡损伤作用； 避免了代谢废物对细胞的毒害作用； 无剪切作用； 传质速率高； 可用于高密度细胞培养。 特点 培养液、细胞从反应器底部进入，无血清培养液进入“内室”(纤维管内)