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第二章 工业发酵菌种选育 第一节 工业发酵生产菌种 一 工业常用的生产菌种 细菌 放线菌 酵母菌 霉菌 1、细菌 2、放线菌 常用的放线菌：链霉菌属、小单孢菌属和诺卡氏菌属等。 它的最大经济价值在于能产生多种抗生素。如链霉素、红霉素、金霉素、庆大霉素等。 3、酵母菌 4、霉菌 二 微生物的代谢产物 初级代谢产物 次级代谢产物 转化产物 初级代谢和次级代谢关系 1、初级代谢产物 是指微生物通过代谢活动所产生的、自身生长和繁殖所必需的物质，如氨基酸、核苷酸、多糖、脂类、维生素等。 初级代谢作用能使营养物转化为结构物质与具生理活性物质为生长提供能量。 严格受代谢调控控制。 2、次级代谢产物 通过次级代谢合成的产物根据其作用,可将其分为抗生素,激素,生物碱,毒素等类型. 以初级代谢产物为原料进行合成。 合成受环境影响大，对自身无明确生理作用。 3、转化产物 外源物质加入培养基后，在微生物代谢过程结构发生了化学变化所得的产物。 降解木质素类真菌和能降解多环芳香烃类的球红假单胞菌作为煤炭转化用的微生物， 三 发酵对生产菌种的要求 微生物的特性 工业化菌种的要求 理想的生产菌种 1、微生物的特性 2、工业化菌种的要求 3、理想的生产菌种 生长繁殖迅速； 产量高； 易培养； 发酵周期短； 耐噬菌体； 纯种。 四 工业发酵菌种的来源 从自然界中分离 对野生菌株进行人工诱变 使用重组DNA技术改造 菌种保藏机构获取 从正突变的生产菌中获取 第二节 生产菌种的选育 目前育种总趋势 菌种选育的主要目的 菌种选育的重要指标 常用的菌种选育方法 一、目前育种总趋势 从野生菌转向变异菌 自然选育转向代谢育种 从诱发基因突变转向基因重组的定向育种。 二、菌种选育的主要目的 提高产量 改进质量 增加新品种 改善工艺条件 实 例 三、菌种选育的重要指标： 菌种的营养特征 菌种的生长温度 菌种的适应性 菌种的稳定性 产物的得率和产物的浓度 产物回收难易 四、常用的菌种选育方法 自然选育 诱变育种 杂交育种 基因工程育种 常用的名词 自发突变和诱发突变 突变率 正向变异（有益于生产的变异） 负向变异（不利于生产的变异） 衰退（菌种发生了负向变异） 复壮（使衰退的菌种恢复原有的优良性能） 1、自然选育 定义 目的 特点 操作步骤 1）定义 指利用微生物在一定条件下产生自发突变，通过分离、筛选排除衰变型菌落，从中选择正向变异菌株的过程。 自然育种的成功实例 2）目的 纯化 复壮 稳定生产 3）特点 自发突变率低，变异程度较轻微，变异过程十分缓慢（突变率10－9～10－6） 自发突变不定向，负向变异可能性大，正向变异可能性小 4）操作步骤 采样 采样对象 采样季节 采样方式 采样对象—土壤 细菌和放线菌 一般园田土和耕作过的沼泽土 酵母和霉菌 富含碳水化合物的土壤和沼泽地中,如一些野果生长区和果园内 采样的对象也可以是植物、腐败物品、某些水域等。 采样季节 以温度适中，雨量不多的初秋为好 增殖培养 通过选择培养基来控制 例如碳源利用的控制 可选定糖、淀粉、纤维素或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。 纯种分离 通过增殖培养，微生物还处于混杂生长状态 进一步应用选择性控制条件分离 纯种分离的方法有稀释分离法、划线分离法等 稀释分离法 平皿划线分离法 从生产性能考察 小型发酵试验（摇瓶试验）考察发酵菌的生产性能，摸索最优的发酵菌种。 筛选原理 变色圈法 透明圈法 生长圈法 抑菌圈法 自然界天然微生物可能产生毒素 据规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作为与食品工业有关的菌种，均需通过两年以上的毒性试验。 2、诱变育种 青霉素生产菌株的诱变育种 1943年，产黄青霉每毫升发酵液只产生约20单位的青霉素，通过透变育种和其它措施配合，目前的发酵单位已达到每毫升5万～10万单位。 （1）诱变育种的步骤 出发菌株的选择 处理菌悬液的制备 关键—制备单细胞和单孢子状态、活力类似的菌悬液 诱变霉菌或放线菌时，应处理孢子；对芽孢杆菌则应处理芽孢 要得到均匀分散的细胞悬液，可用无菌的玻璃珠来打散成团的细胞，然后再用脱脂棉过滤 菌悬液溶度：真菌、酵母（106—107个/ml）；细菌（ 108个/ml），一般用生理盐水或0.1M的磷酸缓冲液稀释。 突变的诱发（诱变剂的选择） 诱变剂协同效应 大规模的筛选： 用死亡率90～99.9％的高剂量； 小规模的筛选： 常用死亡