株假交替单胞菌的分离与鉴定.pdf

江苏农业科学　２０１３年第４１卷第１０期 — ２１１— 白雪松，张晓君，毕可然，等．１株假交替单胞菌的分离与鉴定［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（１０）：２１１－２１６． １株假交替单胞菌的分离与鉴定 １，２ １ １ １ １ １ 白雪松 ，张晓君 ，毕可然 ，樊　星 ，阎斌伦 ，秦国民 （１．淮海工学院海洋学院江苏省海洋生物技术重点实验室，江苏连云港２２２００５；２．中国矿业大学，江苏徐州２２１１１６） 　　摘要：２０１２年５月江苏连云港某育苗场日本对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）蚤状幼体发生群体死亡，自幼体中分离到优 势菌株ＸＳ－１。对菌株ＸＳ－１进行了形态特征、理化特性等表观生物学特性检验，并进行了１６ＳｒＲＮＡ基因的同源性 检索与系统发育学分析。结果表明菌株ＸＳ－１具有假交替单胞菌属的特征，在系统发育树中与Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓｌｉ ｐｏｌｙｔｉｃａ聚为一个分支，自举值达１００％。毒力试验表明，该菌对日本对虾蚤状幼体和仔虾的半数致死量（ＬＤ ）分别为 ５０ ６ ６ １．３×１０ＣＦＵ／ｍＬ和２．０×１０ＣＦＵ／ｍＬ。综合菌株ＸＳ－１的形态特征、理化特性及１６ＳｒＲＮＡ基因的同源性检索与系 统发育学分析，鉴定ＸＳ－１为Ｐ．ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ，且对日本对虾蚤状幼体及仔虾均具有毒力。药敏试验表明，该菌对阿奇霉 素、环丙氟哌酸、头孢曲松、复方新诺明等１１种药物敏感（Ｓ），对卡那霉素、苯唑青霉素、新生霉素耐药。 　　关键词：日本对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）；Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ；１６ＳｒＲＮＡ ＋ 　　中图分类号：Ｓ９４５．４５　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）１０－０２１１－０５ 　　假交替单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ）是 Ｇａｕｔｈｉｅｒ等根据 １　材料与方法 １６ＳｒＲＮＡ序列建立起来的有别于假单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ） ［１］ 和交替单胞菌属（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ）的新属 ，已经鉴定到种的有 １．１　发病幼体 南极洲假交替单胞菌（Ｐ．ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）、柠檬假交替单胞菌 患病日本对虾蚤状幼体取自江苏省连云港市某对虾育苗 （Ｐ．ｃｉｔｒｅａ）、杀鱼假交替单胞菌（Ｐ．ｐｉｓｃｉｃｉｄａ）和河豚毒素假交 场，症状为摄食减少、反应迟缓、部分上浮水面，部分幼体可见 替单胞菌（Ｐ．ｔｅｔｒａｏｄｏｎｉｓ）等３０多种，国外学者已分离鉴定出 体色发红或发白、刚毛断裂、附肢不健全。试验用健康日本对 ［２－６］ 了多株假交替单胞菌 。该菌广泛分布于海洋中，能产生 虾蚤状幼体及仔虾均取自另一对虾育苗场。试验期间，每日 毒素、胞外多糖、胞外酶和病毒活性物质等与其致病性有关的 以人工饵料喂食１次，养殖用水为曝气３ｄ的海水，ｐＨ值为 多种物质，是一类条件致病菌。假交替单胞菌可引发皱纹盘 ７．２，水温（２２±２．５）℃。 ［７］ 鲍溃烂病、大黄鱼体表溃烂病、中华绒螯蟹颤抖病等 。王 １．２　病原菌的分离与纯化 印庚等报道，该菌可引起养殖刺参（Ａｐｏｓｔｉｃｈｏｐｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）暴 将患病蚤状幼体养殖用水涂布于２２１６Ｅ、普通琼脂平板