人原代胃癌细胞中肿瘤干细胞的分离与鉴定.pdf

肿瘤2014 年8 月第34 卷第8 期　TUM OR Vol. 34, August 2014　　 719 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2014.08.007 Copyright© 2014 by TUM OR Basic Research 基础研究 · 人原代 胃癌细胞 中肿瘤干细胞的分离与鉴定 1 2 3 1 1 1 1 胡孔旺，秦　蓉 ，吴黎明，朱化刚，韩文秀，尹纯林 ，李鸿君 1. 安徽医科大学第一附属医院普外科，安徽 合肥　230022 ；2 . 安徽医科大学第一附属医院病理科，安徽 合肥　 230022 ；3. 安徽医科大学第一附属医院放疗科，安徽合肥　230022 [ 摘要 ]　目的：探讨联合应用无血清微球培养技术及磁珠分离技术从新鲜胃癌组织中分离与鉴定人胃癌干细胞的 方法。方法：利用新鲜胃癌组织获得胃癌原代培养细胞，行苏木精- 伊红 （hematoxylin-eosin ，HE ）染色及癌胚 抗原 （carcino-embryonic antigen ，CEA ）免疫组织化学鉴定证实为胃癌细胞后，体外进一步行无血清微球体培养 获得胃癌微球体细胞；采用免疫荧光法检测胃癌球体细胞中CD44 的表达，并以CD44 为标志物对胃癌球体细胞 进行免疫磁珠分选；将分选出的CD44 ＋细胞接种SCID 小鼠，观察移植瘤的生长情况，HE 染色观察移植瘤组织 中细胞形态结构的情况，免疫组织化学法检测CEA 和CD44 的表达情况。结果：17 例新鲜胃癌组织中成功培养出高、 中和低分化程度胃癌细胞各1 例；以无血清微球体培养法培养获得胃癌微球体细胞中CD44 高表达；分选获得的 CD44 ＋细胞更早更快形成移植瘤，移植瘤组织见干细胞的自我更新及分化特性。结论：利用无血清微球体培养法 结合以CD44 为标志物的免疫磁珠分离技术可以高效募集新鲜胃癌组织中的肿瘤干细胞。 [ 关键词 ]　胃肿瘤；肿瘤干细胞；抗原，CD44 ；动物，实验性 [中图分类号]　R735.2 [文献标志码] A [文章编号]　1000-7431 (2014) 08-0719-08 Isolation and identification of cancer stem cells in human gastric cancer primary cells 1 2 3 1 1 1 1 HU Kong-wang , QIN Rong , WU Li-ming , ZHU Hua-gang , HAN Wen-xiu , YIN Chun-lin , LI Hong-jun 1. Department of General Surgery, First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei 230022, Anhui Province, China; 2. Department of Pathology, First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei 230022, Anhui Province, China; 3. Department of Radiation Therapy, First Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei 230022, Anhui Province, China [A BSTRA CT]　Objective: To isolate and identify the cancer stem cells in human fresh gastric