第六章细菌对抗菌药物敏感与耐药性.pptVIP

微生物学检验 第六章 细菌对抗菌药物敏感性与耐药性 本 章 内 容 学习目标 学习目标： 1．掌握 抗菌药物敏感试验常用方法，纸片扩散法（K-B法）的操作方法、结果判断及实验质量影响因素 2．熟悉 耐药表型检测；β-内酰胺酶检测方法；超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）检测方法 3．了解 临床常用抗菌药物种类；药敏试验中药物选择原则 本章重点：★纸片扩散法（K-B法）的操作方法及结果判断 ★药敏试验的临床意义 第一节 临床常用抗菌药物 一、抗菌药物分类 1.β-内酰胺类：抑制转糖基酶、转肽酶、D-羧肽酶、内肽酶，从而细菌细胞壁合成。 2.氨基糖苷类：抑制mRNA的转录和蛋白质的合成。 3.喹诺酮类：作用于DNA旋转酶，干扰细菌DNA复制、修复和重组。 4.大环内酯类：结合细菌核糖体50S大亚基，抑制细菌蛋白质合成和肽链延伸。 5.糖肽类：阻断肽聚糖合成，阻阻碍细胞壁合成。 第一节 临床常用抗菌药物 一、抗菌药物分类 6.磺胺类：竞争性与二氢叶酸合成酶结合，使核酸合成抑制。 7.四环素类：结合细菌30S核糖体亚基，抑制蛋白质合成。 8.氯霉素类：作用细菌70S核糖体的50S亚基，抑制蛋白合成。 9.林可酰胺类：结合细菌核糖体50S大亚基，抑制蛋白质合。 10.其他抗菌药物：硝基肤喃类、硝基咪唑类、链阳霉素类、噁唑烷酮类等。 二、常规药敏试验药物选择原则 我国主要遵循美国临床实验室标准化委员会（CLSI）制定的抗菌药物选择原则。 第一节 临床常用抗菌药物 返回章内容 第二节 抗菌药物敏感试验 一、概述 测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏感试验（AST） 菌株被推荐剂量治疗感染部位可达到的抗菌药物浓度抑制 药物在生理浓集部位有临床效果，还代表敏感与耐药之间缓冲区 菌株不能被常规剂量抗菌药物可到达的浓度所抑制 敏感（S） 耐药（R） 中介（I） 抗菌药物敏感试验结果 第二节 抗菌药物敏感试验 二、纸片扩散法 含有定量抗菌药物纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含药物吸收琼脂中水分溶解后向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，形成透明抑菌圈。抑菌圈大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系。 第二节 抗菌药物敏感试验 二、纸片扩散法 1.水解酪蛋白（MH）培养基，pH7.2～7.4，做成琼脂厚度4mm，直径90mm的平板 2.挑取孵育16～24小时已分纯菌落，置于生理盐水管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准 第二节 抗菌药物敏感试验 二、纸片扩散法 3.用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液 4.在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周 5.平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘大于15mm 第二节 抗菌药物敏感试验 二、纸片扩散法 6.平板置35±2℃孵育箱，16～18小时后判读结果。苛养菌应在含5%CO2环境中培养20～24小时 7.用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径。按照CLSI标准判读，报告敏感、中介、耐药 第二节 抗菌药物敏感试验 纸片扩散法图解 抑菌圈 细菌生长 药敏纸片 细菌菌落 抗生素浓度 耐药 敏感 第二节 抗菌药物敏感试验 三、稀释法 以一定浓度的抗菌药物与培养基进行一系列不同倍数稀释，经培养后观察被试菌株的最低抑菌浓度，根据CLSI提供的MIC解释标准判断细菌对抗菌药物的敏感程度。稀释法中使用肉汤培养基为肉汤稀释法，使用琼脂培养基为琼脂稀释法 第二节 抗菌药物敏感试验 三、稀释法 1. 肉汤稀释法 第二节 抗菌药物敏感试验 三、稀释法 2.琼脂稀释法 浓度 16 32 64 128 256 μg/ml 制备含对倍抗生素浓度梯度的平板，制备菌悬液，点种菌，104/每点，孵育35℃，16～20h ，判读结果 第二节 抗菌药物敏感试验 四、E-test法 E-test法（epsilometer test）结合了扩散法和稀释法的原理和特点，对抗菌药物直接测量MIC。E试条为宽5mm、长50mm的无孔试剂载体，一面固定有浓度呈连续指数增长的抗菌药物，另一面有所含药物浓度的刻度 第二节 抗菌药物敏感试验 四、 E-test法 1.菌液制备及接种均同纸片扩散法 2.于90mm平板上可放E试验试条1 ～ 2条，140mm平板最多可放6条 3. 孵育、温度及时间同纸片扩散法 4.读取椭圆形抑菌环与E试条的交界点值即为