临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第十七章-厌氧性细菌及检验.docVIP

第 PAGE \* MERGEFORMAT 1 页 共 NUMPAGES \* MERGEFORMAT 3 页 第十七章　厌氧性细菌及检验 　　本章内容　　一、概述　　厌氧菌的分类　　厌氧菌的临床意义　　厌氧菌感染　　厌氧菌标本的采集与送检　　厌氧菌的分离与鉴定　　厌氧环境的指示　　　　二、常见厌氧菌　　破伤风杆菌　　产气荚膜梭菌　　肉毒梭菌　　艰难梭菌　　厌氧球菌　　无芽胞厌氧菌 　　厌氧菌概述　　一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。　　G+有芽胞的梭菌：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。　　G+/G-无芽胞的球菌与杆菌：人体正常菌群，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。致病性属条件致病性的内源性感染。　　 　　厌氧菌概述——分类　　《伯杰系统细菌学手册》分类标准：　　　　无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括130个种。　　据耐氧性分类　　（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。　　（2）微需氧菌：能在含5%～10%CO2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。　　（3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。 　　厌氧菌概述——临床意义及感染　　感染类型　　外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。　　内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌群，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人群中传播。　　感染的危险因素：　　组织缺氧缺血；　　机体免疫功能下降；　　某些手术及创伤易发生厌氧菌感染；　　长期应用某些抗菌药物；　　深部需氧菌感染。 　　感染的临床指征：　　感染局部产生大量气体；　　多发生在黏膜附近；　　深部外伤后继发感染；　　分泌物有恶臭或为暗红色；　　常见于长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例；　　镜检有细菌，常规培养阴性。　　 　　厌氧菌概述——标本的采集与送检　　重要原则：标本绝对不能被正常菌群所污染；应尽量避免接触空气。 适宜标本 血液、骨髓、脑脊液、关节液、心包液、胸腔积液、腹腔液、胆汁、由活检或尸体解剖获得的组织标本、深部脓肿抽取物、经环甲膜以下或肺穿刺抽取的肺渗出物、后穹窿穿刺抽取的盆腔渗出液及无菌套管抽取的宫腔内容物、膀胱穿刺液及其它组织穿刺液等 不宜标本 鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠拭子、喀出的痰液、自然排出的尿液和导出的尿液、流出的脓液、接近皮肤或黏膜的分泌物、阴道分泌物、胃和小肠内容物、粪便（艰难梭菌除外）等 　　厌氧菌概述——标本的采集与送检　　采集　　多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。　　厌氧培养最理想的检查材料是组织标本，因厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长。　　送检　　针筒运送：液体标本。　　无菌小瓶运送：液体标本。　　棉拭子运送：需使用特制运送培养基。　　厌氧罐/厌氧袋运送：较大组织块或床边接种的培养皿等。　　标本送到实验室后，应在20～30min内处理完毕，最迟不超过2h。如不能及时接种，应室温保存。　　 　　厌氧菌概述——分离与鉴定　　直接镜检　　根据形态和染色性，结合标本性状与气味，初步对标本中可能有的细菌作出估计。　　分离培养　　初代培养和次代培养两个阶段。　　初代培养的一般原则：　　（1）先将标本涂片染色直接镜检，指导培养基的选择；　　（2）尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基；　　（3）最好多选1～2种覆盖面不同的选择性培养基；　　（4）尽量保证培养基新鲜；　　（5）要考虑到微需氧菌存在的可能。 　　非选择培养基：心脑浸液琼脂（BHI）、布氏琼脂（BR）、胰豆胨肝粉琼脂（GAM）、胰胨酵母琼脂（EG）、CDC厌氧血琼脂等。　　选择培养基：KVLB血平板（即上述非选择培养基中加卡那霉素和万古霉素），KVLB冻溶血平板（产黑素类杆菌早期产生黑色素），七叶苷胆汁平板（BBE，用于脆弱类杆菌），FS培养基（梭杆菌选择培养基），卵黄（EYA）及兔血平板（RBA）（用于产气荚膜梭菌），CCFA培养基（艰难梭菌选择培养基）等。 　　分离培养　　每份标本至少接种3个血平板，分别置于有氧，无氧及5%～10% CO2环境中培养，以便正确地培养出病原菌，从而判断其为需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌或厌氧菌中的哪一类。　　厌氧培养法　　（1）厌氧罐培养法　　（2）气袋法