酶法合成β-丙氨酸工艺条件的研究-微生物学专业毕业论文.docxVIP

浙江工业大学2008届硕士研究生毕业论文酶法合成B一丙氨酸工艺条件的研究 浙江工业大学2008届硕士研究生毕业论文 酶法合成B一丙氨酸工艺条件的研究 摘要 本论文研究了大肠杆菌的破壁条件、天门冬氨酸Ⅸ．脱羧酶的提取 条件及其细胞的酶学性质，并将其纯化。得到最佳破壁方法为研磨加 Img／mL溶菌酶，最佳提取介质为pH8的0．05mol／L磷酸缓冲液。最 适温度37C，最适pH为7。在100C下放置lh酶活为0，pH3时放 置1h酶活仅剩33U。最佳转化时间24h。经过盐析、离子交换和凝胶 层析后，酶得到了很好的纯化，由于实验中酶活的损失，最终的酶活 降到了纯化前的3．66％。 对工程菌E eoli BL21(DE3)I pET28 b(+)的固定化条件进行研究， 并研究了固定化细胞的性质。得出最佳的固定化细胞交联的条件为温 度30。C，pH5．5，时间6h。最适温度37C，最适DH7．5，在pH2和 pHl l的水溶液中浸泡30min仍然具有酶活。在100℃的高温下放置 1h后酶活趋近于O。连续转化三次后仍有接近85％的酶活。 对酶法合成p．ala的工艺条件进行了研究，得到的最佳发酵条件 为接种量0．5％，发酵温度37℃，培养时间28h，诱导物添加时间3h， 诱导物添加浓度49／L，最佳转化条件为底物类型天门冬氨酸氨，底 物浓度0．IM，转化温度37C，转化pH6的组合，转化时间在，