分子生物学讨论人类基因组DNA提取.pptxVIP

人类DNA基因组提取分子生物学第一次讨论;人类基因组DNA提取的原理;人类基因组DNA提取的原理;DNA整体表现为酸性，带负电。是极性化合物，微溶于水，不溶于乙醇，苯酚，氯仿，乙醚等有机溶剂，形成沉淀。从而被分离提取出来。 蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀，从而被除去。 ;人类基因组DNA提取的方法;葡聚糖悬浮法分离抗凝全血中的白细胞:加2.5 mL 4%葡聚糖溶液于试管中，将5 mL新鲜抗凝全血加于葡聚糖溶液之上，净置30 min后，吸取黄色上清〔白细胞悬液)，离心得白细胞，洗涤。 ;在5 mL 15 mmol/L TES溶液中悬浮白细胞，加蛋白酶K 250一350 微克，10% SDS 260微升，充分混匀，置37℃过夜。 ;冷却至4 ℃加等体积Tris饱和酚，充分混匀，4 ℃ 3 000 r/min离心30 min吸取上层溶液移至另一离心管。加等体积Tris饱和酚，重复上一步Tris饱和酚抽提。 ;加等体积氯仿/异戊醇，充分混匀，4 ℃3 000 r/min离心5 min，吸取上层溶液移至另一离心管。重复数次。 吸取上层溶液至2.5倍体积冷无水乙醇中，轻摇至DNA析出。用75%冷乙醇清洗3一4次。加适量TE溶液溶解DNA。