分子生物学基因组转录组蛋白组.pptVIP

Trp:色氨酸 b. MALDI-TOF (基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱) 4.3 蛋白质组研究的方法 A. 蛋白谱 用于鉴定蛋白组中的蛋白质，最多可以分析出50个氨基酸长度的多肽，因此一个蛋白质可以通过胰酶将其消化后进行测定。 一旦多肽片段被离子化，多肽的质量/电荷比就可以通过它在质谱仪中从电离源到检测器的“飞行时间”来确定。通过质荷比能够确认多肽片段的分子质量。 计算机中含有一个由所研究的物种基因组编码的每一个蛋白质经胰酶消化后各个片段的预计相对分子质量的数据库，计算机通过比较数据库与检测到的多肽片段的分子质量来确认最可能的初始蛋白质。 * 质量/电荷比 多肽通过来自激光的脉冲能量被电离化 柱腔 * 质量/电荷比 波谱数据 计算机通过比较数据库与检测到的多肽质量来确认最可能的初始蛋白质。 * 4.3 蛋白质组研究的方法 B. 蛋白质印迹法（Western杂交） Western杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异性蛋白质的检测方法。 其原理是：生物中含有一定量的目标蛋白。先从生物细胞中提取总蛋白或目标蛋白，将蛋白质样品溶解于含有去污剂和还原剂的溶液中，经SDS电泳将蛋白质按分子量大小分离，再把分离的各蛋白质条带原位转移到固相膜（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，接着将膜浸泡在高浓度的蛋白质溶液中温育，以封闭其非特异性位点。 * 4.3 蛋白质组研究的方法 B. 蛋白质印迹