棉花与烟粉虱互作的蛋白组学分析和GhMLP423基因功能分析-作物遗传育种专业毕业论文.docxVIP

兰!奎些奎兰三竺!!壁堡主旦圣竺堂篁丝茎3．5．1VIGS干涉表达载体完成和干涉效果表型变化．．233．5．2棉花防御烟粉虱过程中活性氧平衡变化233．5．3棉花防御烟粉虱过程中激素水平变化254讨论．26参考文献．．29附录．33致谢56万方数据棉花与烟粉虱互作的蛋白组学分析与GhMLP423基因功能分析摘要棉花作为我国最重要的经济作物之一，在生产过程中长期遭到各种虫害的严重 威胁，近些年来很多棉花种植区烟粉虱频繁发生，给棉花生产带来严重危害，使得 棉花产量和纤维品质大幅度下降。烟粉虱刺吸胁迫后，棉花植株响应机制的研究还 没有详细报道，其自身的生理机制的变化还不清楚。主要乳状蛋白(MLPs)是Betvl 蛋白亚家族之一，MLPs与另一个亚家族病理机制相关蛋白10(PRl0)非常相似， 然而目前关于MLP家族蛋白在植物响应胁迫方面的机制还不清楚，我们希望通过相 关的分子生物学技术探索MLP蛋白在棉花响应烟粉虱胁迫过程中的作用。我们通过蛋白组手段对烟粉虱抗性较强的冀合321棉花品种和抗性较弱的中棉 所42棉花品种进行蛋白组表达差异分析，将表达差异的蛋白质进行质谱鉴定分析， 成功鉴定出263个棉花蛋白质，去除重复冗余后有176个可供分析的特异蛋白质。 通过功能富集分析和代谢通路分析发现这些蛋白质有相当一部分参与了氧化还原反 应，而且部分是与活性氧信号路径相关的酶。为了进一步了解烟粉虱侵染棉花后活 性氧水平变化情况，我们对抗性材料冀合321进行酶活力测定发现超氧化物歧化酶 活性比对照显著升高，过氧化氢含量初期升高后逐渐降低，而过氧化物酶活力显著 降低，表明活性氧信号路径可能参与了棉花抵御烟粉虱侵染的过程。烟粉虱侵染后 棉花的GhMLP423蛋白表达上升。为了探索棉花MLP蛋白在棉花响应烟粉虱胁迫 中的作用，我们选取了棉花MLP423基因进行后续的生物学验证。通过VIGS技术 成功干涉了MLP423基因并获得了干涉植株。同时，我们对干涉植株进行了酶活力 和过氧化氢含量测定。棉花干涉系GhMLP423的过氧化物酶活力低于对照，超氧化 物歧化酶活力高于对照，将超氧根离子转化为过氧化氢，因此初期过氧化氢含量高 于对照，随着时间点延长而逐渐降低。另外，我们对于涉植株进行了激素水平测定 发现MLP423干涉系植株叶片SA含量低于正常植株，烟粉虱侵染后明显高于非侵染植株，同时MLP423干涉系植株叶片中过氧化氢含量也低于正常植株，烟粉虱侵 染后都有所升高，干涉系也明显低于对照，可能由于烟粉虱侵染棉花时SA积累抑 制了过氧化氢酶的活性使得过氧化氢积累。与对照植株相比，MLP423干涉系没有 积累ABA和JA而且对烟粉虱表现出更感的现象，初步推断MLP423可能参与了JA信号路径的传导过程。我们通过对烟粉虱不同抗性的棉花蛋白组进行表达差异分析，筛选对抗烟粉虱万方数据华中农业大学2016届硕士研究生学位论文的棉花抗性相关的基因，同时通过对烟粉虱侵染后的棉花进行生理指标分析，进一 步验证在棉花防御烟粉虱过程中相关蛋白的作用。关键词：烟粉虱：棉花蛋白组；VIGS干涉；酶活性；激素水平万方数据棉花与烟粉虱互作的蛋白组学分析与GhMLP423基因功能分析AbstractAs one of the most important economic crops in China，cotton always has been confronted with a serious threats from all kinds of pests during the long producting process．In recent years，whiteflies occur frequently in many cotton-growing areas，which has brought seriously harm to cotton production and fiber quality．The mechanism of the response to whiteflies stress on the cotton is still unclear．We analyze the difference of all expressed proteins between the strong whitefly-resistance cotton variety(Jihe 32 1)and the susceptive cotton variety(CCRI 42) by means of proteomics．We have identified 263 proteins successfully by massspectrometry,and there a