棉花体细胞胚胎发生相关基因GhHmgB3的克隆及功能分析-作物遗传育种专业毕业论文.docxVIP

{I吣Y舢2m0叭0删眦4州6m4m3帆华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 {I吣Y舢2m0叭0删眦4州6m4m3帆 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 如需保密，解密时间 年 月 日 是否保密 ’。否 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果．尽我所知，除了文中特别加l；乏标注和致谢的地方外，论文中不包含其他入已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中傲了明确的说明，并表示了谢意． 研究生签名：嘲两忱 时同：知ff 年‘月牟日 学位论文使用授权书 学位论文储馘：稿靴 导师獬，删a 签名日期：知f7年6月争日 签名日期： fl#-∥月驴日 注：谚将本袭赢接装订在学位论文的廓页翱目录之同 棉花体细胞胚胎发生相关基因GhHmgB3的克隆及功能分析目录 棉花体细胞胚胎发生相关基因GhHmgB3的克隆及功能分析 目录 摘要 ．．I Abstract ． ．．III 缩写名词表 VI l文献综述 ．1 1．1植物体细胞胚胎发生研究概况 1 1．1．1影响植物体细胞胚胎发生的因素 ．．1 1．1．2影响植物体细胞胚胎发生的关键基因 ．．3 1．1．2．1 WUSCHEL(rvus)基因 ．3 1．1．2．2 SERK基因 ．3 1．1．2．3上压么F】，CD丁lZEDDⅣ(LEC)基因 ．4 1．1．2．4 late embryo-abundant(LEA)基因 5 1．1．3植物体细胞胚胎发育的机制 ．6 1．2 HmgB基因的功能研究 ．．6 1．2．1 HmgB家族的结构特点和命名方式 6 1．2．2 HmgB基因在酵母中的研究 8 1．2．3 HmgB在植物中的研究 8 1．2．4 HmgB在动物中的研究 9 1．2．4．1细胞外HmgB蛋白在疾病研究中的作用 9 1．2．4．2 HmgB蛋白在生长发育中的作用 1l 1．3 p-catenin的功能研究 12 1．3．1 p．catenin的结构特点 12 1．3．2 p-catenin的功能 13 1．3．2．1 p-catenin通过Wm途径决定细胞的命运 。13 1．3．2．2 p-catenin促进细胞的增殖 ．15 1．3．2．3 p-catenin在疾病和癌症中的研究 16 1．4本研究的目的与意义 ．17 华中农业大学2011届博士研究生学位论文2陆地棉HmgB家族基因的克隆和鉴定 华中农业大学2011届博士研究生学位论文 2陆地棉HmgB家族基因的克隆和鉴定 19 2．1引言 1 9 2．2材料与方法 19 2．2．1实验材料，主要试剂和仪器 ．19 2．2．1．1实验材料 1 9 2．2．1．2主要试剂 l 9 2．2．2实验方法 ．20 2．2．2．1 RNA的抽提 。20 2．2．2．2 mRNA的分离和RACE模板的制备 ．．20 2．2．2-3 HmgB基因的全长克隆 21 2．2．2．4陆地棉HmgB家族基因的表达模式分析 ．22 2．2．2．5陆地棉HmgB蛋白序列的进化树分析 ．24 2．3结果与分析 26 2．3．1 RNA的提取、mRNA的分离 26 2．3．2 RACE扩增与全长序列的获得 ．26 2．3．4 GhHmgB家族基因在不同组织内的表达模式 27 2．3．3 GhHmgB家族基因的生物信息学分析 29 2．4讨论 ．3 1 2．4．1 GhHmgB家族成员RACE克隆的几点经验 3 1 2．4．2 GhHmgB家族成员的结构特点 3 1 3 RNAi载体构建，转基因材料的鉴定与表型观察 。33 3．1材料与方法 ．33 3．1．1棉花材料 。33 3．1．2主要菌株和试剂 33 3．1．2．1所用载体菌株 33 3．1．2．2相关酶类和试剂 33 3．1．2．3转基因相关培养基 33 3．1．2．4 DNA抽提相关溶液： ．33 3．1．2．5 Western相关试剂 ．．34 棉花体细胞胚胎发生相关基因GhHmgB3的克隆及功能分析3．1．3 棉花体细胞胚胎发生相关基因GhHmgB3的克隆及功能分析 3．1．3 RNAi载体的构建和遗传转化 ．．37 3．1．4农杆菌介导的遗传转化 37 3．1．4．1下胚轴、胚性愈伤的诱导 ．37 3．1．4．2农杆菌转化 。38 3．1．4．3转基因材料的获得 ．38 3．1．5转基因材料的鉴定 38 3．1．5．1转基因材料DNA水平检测 38 3．1．5．2转基因材料RNA水平检测 39 3．1．5．3转基因材料蛋白质水平检；!贝lJ(Westem blotting) 39 3．1．