基于理性设计的β.pdf

浙江大学学报 农业与生命科学版 401 58~64 2014 JournalofZheian Universit A ric LifeSci j g y g htt www ournals zu edu cn ar p j j g E-mail zdxbnsb@zu edu cn DOI 10 3785 issn 1008-9209 2013 06 011 j j 基于理性设计的 甘露聚糖酶底物亲和力的定向改造 - β 1 1 1 1 2* 魏喜换 王春娟 赵梅 李剑芳 邬敏辰 江南大学食品学院 江苏 无锡 江南大学无锡医学院 江苏 无锡 1 214122 2 214122 摘要 以宇佐美曲霉 的 家族 甘露聚糖酶 为研究对象 对其底物亲 AserillususamiiYL-01-78 5 - AuMan5A p g β 和力的定向改造进行理性设计及定点突变以获取米氏常数 值较低的突变酶 Y111F 首先采用同源建模 Km AuMan5A 和分子对接模拟等方法预测 与甘露二糖对接复合物的空间结构 在此结构上使用 软件统计到距 AuMan5A PMol y 、 甘露二糖 以内的 个氨基酸位点 其次对不同来源的 与 一级结构序列全同率大于 的 甘露 8Å 38 AuMan5A 50% - β 聚糖酶进行多序列比对 排除 个保守氨基酸位点 依据 个非保守位点上的氨基酸性质及其所处空间位置 选 21 17 111 206 243 择 中的 、 和 作为拟突变氨基酸 将它们分别替换为性质相似的或在其他 甘露聚糖 AuMan5A Tr Phe Tr