麦冬总皂苷的分离纯化及活性研究-分析化学专业毕业论文.docxVIP

西南科技大学硕士研究生毕业论文 西南科技大学硕士研究生毕业论文 第1页 摘 要 本文以麦冬为原料，用95％乙醇热回流法提取麦冬总皂苷和总黄酮，以 70％乙醇为洗脱液通过大孔吸附树脂柱分离得到总皂苷，利用硅胶柱色谱分 离得到麦冬皂苷D；采用酸碱沉淀法分离得到总黄酮；采用冷乙醇分离法提 取分离得到总蛋白质。 以蛋白质在紫外280 nm的吸光度为评价蛋白提取量的指标，优化从麦 冬中提取总蛋白质的最佳条件，分别考察了不同提取料液比、不同提取溶剂、 不同提取时间和不同提取液浓度，试验结果显示：4℃时，以l：20(g：mL) 的料液比，用pH为9．00的磷酸盐缓冲溶液提取时间为6 h所得的麦冬总蛋 白提取量最多。 以液相色谱-质谱联用法(1iquid chromatography—mass spetrometry， LC．MS)，建立了LC．MS法测定麦冬皂苷D含量的方法，对方法学进行了考 察。试验结果表明：采用MonoChrom(2．0 mmxl50 mm，5斗m)色谱柱，流动 相由甲醇一纯水(80：20)组成，流速O．3 mL／min，柱温30℃，质谱采用ESI 电离源、负离子检测模式。麦冬皂苷D线性回归方程为Y=37415X+128．32， r=0．9999；麦冬皂苷D在0．05～1．60 1．tg／mL线性关系良好；高中低三个不同 浓度的日内RSD分别为1．84％、1．18％、1．79％，日间RSD分别为1．30％、 1．45％、1．80％；高中低三个不同浓度的平均加样回收率分别为111．98％、 103．02％、100．96％，RSD为2．16％、2．85％、3．75％；川麦冬、浙麦冬中麦 冬皂苷D在总皂苷中的含量相差很大，浙麦冬中麦冬皂苷D含量很低。该 方法简单快捷，灵敏度高，重复性好，适于分析测定川麦冬提取物中麦冬皂 苷D的含量以及麦冬药材的质量控制。 以典型抗氧化剂抗坏血酸、硫脲、儿茶素为阳性对照，以IC50值作为评 价样品清除DPPH自由基能力的指标，采用DPPH(1，1．二苯基-2-三硝基 苯肼)法，测定麦冬总皂苷、总黄酮和总蛋白质清除DPPH自由基的能力。 试验结果表明：在波长517 nm测定，DPPH的浓度在65．0-130．0 I．tmol／L具 有良好的线性关系，建立的DPPH自由基清除测定方法可靠、便捷；典型抗 西南科技大学硕士研究生毕业论文 西南科技大学硕士研究生毕业论文 第1I页 氧化剂抗坏血酸、硫脲、儿茶素的IC50值分别为87．05、482．90、10．15 p．g／mL， 麦冬各提取物总皂苷、总黄酮、总蛋白质的IC50值分别为509．0、79．4、46．0 1．tg／mL，各种物质的抗氧化性强弱顺序为：儿茶素麦冬总蛋白质麦冬总 黄酮抗坏血酸硫脲麦冬总皂苷。最终得出麦冬总黄酮和总蛋白质具有 较强的抗氧化能力。 关键词：麦冬 麦冬皂苷D 总黄酮 蛋白质 抗氧化活性 含量测定 液．质联用 西南科技大学硕士研究生毕业论文 西南科技大学硕士研究生毕业论文 第1II页 Abstract． Ophiopogon japonicus was used as raw material in this thesis．The hot reflux method was used to extract Ophiopogon j aponicas total sapomins and total flavonoids．The total saponins was purified by macroporous resin，70％ ethanol was the eluant．Ophiopogonin D was purified by silica gel column chromatograph．The total flavonoids were extracted by acid—base precipitation method．The total proteins were extracted by cold ethan01． The absorbance of proteins at ultraviolet of 280 nm was used as evaluating criterion of proteins extraction．The optimum condition of protein extraction was optimized．Optimal conditions of ophiopogon j aponicus protein were studied by different signal factor experiments of extracting protein