含PR结构域的锌指蛋白5特异性小干扰RNA载体.pdfVIP

　第３３卷　第３期 新乡医学院学报 Ｖｏｌ．３３　Ｎｏ．３ ·１７４· 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 　２０１６年３月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＸｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍａｒ．２０１６ 欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁氉 欁 氉 欁 本文引用：丁琼琼，张彬彬，张亚平，等．含ＰＲ结构域的锌指蛋白５特异性小干扰ＲＮＡ载体构建及干扰效果评 欁 【基础研究】 欁 价［Ｊ］．新乡医学院学报，２０１６，３３（３）：１７４１７７．ＤＯＩ：１０．７６８３／ｘｘｙｘｙｘｂ．２０１６．０３．００４． 氉欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁氉 含ＰＲ结构域的锌指蛋白５特异性小干扰ＲＮＡ载体构建及 干扰效果评价 丁琼琼，张彬彬，张亚平，杨海杰，王　磊，冯志伟 （新乡医学院生命科学技术学院，河南　新乡　４５３００３） 摘要：　目的　构建含ＰＲ结构域的锌指蛋白５（ＰＲＤＭ５）特异性小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）干扰载体并鉴定其干扰效 果。方法　根据小鼠ＰＲＤＭ５基因全长ｃＤＮＡ序列，设计合成６条ｓｉＲＮＡ干扰片段（ｓｉＰＲＤＭ５１、ｓｉＰＲＤＭ５２、ｓｉＰＲＤＭ５ ３、ｓｉＰＲＤＭ５４、ｓｉＰＲＤＭ５５和ｓｉＰＲＤＭ５６）和２条对照序列（ｓｉＣＴＬ１和ｓｉＣＴＬ２），并将前３条干扰片断和ｓｉＣＴＬ１克隆 插入ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ３．１Ｕ６，另３条干扰片断和ｓｉＣＴＬ２插入ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ４．１ＣＭＶ干扰载体中，构建小鼠ＰＲＤＭ５基因的ｓｉＲＮＡ 真核表达载体 ｓｉＰＲＤＭ５１、ｓｉＰＲＤＭ５２、ｓｉＰＲＤＭ５３、ｓｉＰＲＤＭ５４、ｓｉＰＲＤＭ５５和 ｓｉＰＲＤＭ５６，２个对照序列 ｓｉＣＴＬ１和 ｓｉＣＴＬ２，并通过双酶切和测序进行验证，构建成功后转染小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６Ｆ１０并采用实时荧光定量聚合酶链反 应和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测其干扰效率。结果　成功构建真核ｓｉＲＮＡ表达载体，并且所构建的６个干扰载体均可降低小 鼠黑色素瘤细胞中ＰＲＤＭ５基因ｍＲＮＡ表达（Ｐ＜０．０５）。其中ｓｉＰＲＤＭ５２和ｓｉＰＲＤＭ５６载体干扰效果最好。结论　 成功筛选出ＰＲＤＭ５特异性ｓｉＲＮＡ载体，为之后研究锌指蛋白基因ＰＲＤＭ５在小鼠黑色素瘤转移过程中功能及分子机 制打下基础。 关键词：　含ＰＲ结构域的锌指蛋白５；小干扰ＲＮＡ载体；干扰 中图分类号：Ｑ７８　文献标志码：Ａ　文章编号：１００４７２３９（２０１６）０３０１７４０４ ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＰＲｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ５ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡｖｅｃｔｏｒ ＤＩＮＧＱｉｏｎｇｑｉｏｎｇ，ＺＨＡＮＧＢｉｎｂｉｎ，ＺＨＡＮＧＹａｐｉｎｇ，ＹＡＮＧＨａｉｊｉｅ，ＷＡＮＧＬｅｉ，ＦＥＮＧＺｈｉｗｅｉ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＸｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ４５３００３，ＨｅｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔＰＲｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ５（ＰＲＤＭ５）ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）ｉｎ ｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｖｅｃｔｏｒａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｙｉｔｓｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｅｆｆｅｃｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｗｈｏｌｅｃｏｄｉｎｇｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｍｏｕｓｅ ＰＲＤＭ５ｇｅｎｅ，ｓｉｘｓｉＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｆｒａｇｍｅｎｔｓ（ｓｉＰＲＤＭ５１，ｓｉＰＲＤＭ５２，ｓｉＰＲＤＭ５３，ｓｉＰＲＤＭ５４，ｓｉＰＲＤＭ５５ａｎｄ ｓｉＰＲＤＭ５６）ａｎｄｔｗｏｃｏｎｔｒｏｌｓｅｑ