慢性低O2高CO2对小鼠脑组织MPTP及细胞凋亡的影响-神经病学专业毕业论文.docxVIP

温少I1医学院硕士学位论文慢性低O：高CO：对小鼠脑组织MPTP及细胞凋亡的影响 温少I1医学院硕士学位论文 慢性低O：高CO：对小鼠脑组织MPTP及细胞凋亡的影响 中文摘要 目的 1．观察慢性低02高C02对小鼠脑皮层、海马区CytC、AIF表达的影响，从 线粒体角度，探讨慢性低02高C02诱导神经细胞凋亡的可能机制。 2．探讨线粒体通透性转换孔(MPTP)在慢性低02高C02诱导的神经细胞凋 亡中的作用及其机制，并为临床上进行药物干预提供可能的治疗靶点。 方法 第一部分慢性低02高C02对小鼠脑皮层、海马区CytC与AIF表达的影 响 1．参考文献【11，制作动物模型：SPF级雄性C57／BL6小鼠，随机分为对照组 (NC)、慢性低02高C02组(删)，NC组于常温常压条件下饲养，HH组置 于02浓度9％～11％和C02浓度5％～6％的舱内饲养，每天8h，每周6d， 持续4周，其余时间饲养条件与NC组相同； 2．HE染色观察小鼠脑组织病理学变化； 3．免疫组化检测两组小鼠皮层、海马区CytC与AIF的表达水平； 第二部分慢性低02高C02对小鼠脑组织线粒体通透性转化孔的影响 1．模型制备：同第一部分； 2． 小鼠脑组织线粒体分离制备：颈椎脱臼法处死小鼠后，迅速于冰上取脑， 去除小脑和脑干，留下皮层和海马部分，采用差速离心法进行分离线粒体，制 成线粒体悬液，以上所有操作均在4。C冰浴上进行，经詹纳斯绿染色及电镜证 实线粒体结构及观察其形态变化，BCA法进行线粒体蛋白定量，以BSA为标 准。 3．检测MPTP开放情况； 4．荧光分光光度计检测脑线粒体膜电位变化； 5．ELLSA法检测线粒体内的CytC、AIF； 温州医学院硕士学位论文结果 温州医学院硕士学位论文 结果 第一部分慢性低02高C02对小鼠脑皮层、海马区CytC与AIF表达的影 响 1、HE染色观察小鼠脑组织病理学变化： NC组：细胞排列整齐，细胞间质均匀，神经细胞结构正常，未见神经细胞 变性坏死等明显病理变化。HH组：神经细胞结构模糊，胞体发生肿胀、间质出 现水肿，以及不同程度的核质深染、细胞皱缩。 2、小鼠脑皮层和海马区qjCytC与AIF的免疫组化结果： 与NC组比较，HH组在皮层、海马区q]CytC表达的平均光密度IOD／Area值均 有显著差异(P0．05)。与NC组相比较，AIF表达在皮层区有显著差异(PO．05)， 在海马区差异没有统计学意义(PO．05)。 第二部分慢性低02高C02对小鼠脑组织线粒体通透性转化孔的影响 1、小鼠脑组织提取线粒体鉴定： 提取的脑组织线粒体经1％詹纳斯绿B染色液后，光镜下观察到蓝绿色颗 粒状或哑铃状；电镜下观察提取的脑组织线粒体纯度较高，NC组线粒体结构基 本完整，可见双层膜结构，线粒体嵴排列整齐，HIt组的线粒体结构破坏，出现 明显的肿胀，空泡变性，线粒体脊膜破裂，脊突溶解。 2、慢性低02高C02对小鼠脑组织线粒体MPTP的影响 通过检测线粒体的膨胀性变化来分析和观察MPTP开放状态。在细胞凋亡或 坏死时，线粒体内容物通过膜通道孔释放到胞浆中，MPTP的诱导开放，显著改 变线粒体的通透性。我们实验发现，HH组其吸光值比值(A540／Initial A540) 明显降低，有统计学意义(PO．05)，说明慢性低02高C02使小鼠脑组织线 粒体MPTP开放增多。 3、慢性低02高C02对小鼠脑组织线粒体膜电位变化的影响 与NC组相比，HH组线粒体膜电位明显下降(P0．05)。 4、慢性低02高C02对小鼠脑组织线粒体内CytC、AIF的影响 发现造模后，HH组线粒体内的CytC与AIF的表达量均减少，且线粒体I为AIF 的表达量明显少于CytC的表达量。与NC组比较，HH组CytC明显减少，有统计 学意义(P0．05)。 结论 1．慢性低02高C02可增加小鼠脑皮层、海马区CytC与AIF表达，提示神经 细胞凋亡可能与线粒体损伤有关。 温州医学院硕士学位论文2．在慢性低02高C02条件下，小鼠脑组织中线粒体通透性转化孔开放增多， 温州医学院硕士学位论文 2．在慢性低02高C02条件下，小鼠脑组织中线粒体通透性转化孔开放增多， 线粒体膜电位△、王，(m)下降，线粒体存在不可逆性损害。 3．慢性低02高C02可引起脑组织线粒体功能损害，导致神经细胞凋亡，其机 制可能与MPTP的开放密切相关。 关键词：低氧；高二氧化碳血症；线粒体通透性转化孔；线粒体膜电位；细胞 色素C；凋亡； 温州医学院硕士学位论文The 温州医学院硕士学位论文 The Disfunction of Mitochondrial Permeability Transition Pore and the Apoptosis in Mice Brain Iduced