萝卜春化作用及其与DNA甲基化水平的关系-蔬菜学专业毕业论文.docx

浙江大学博士学位论文：萝h春化作用及其与DNA甲基化水平的关系(汪炳良2004)摘要 浙江大学博士学位论文：萝h春化作用及其与DNA甲基化水平的关系(汪炳良2004) 摘要 植物的春化作用是一个“古老”的话题，人们早就发现，许多生长在高纬度地区 的植物在开花前需要经历一个相当长的低温时期。通过模式植物拟南芥的研究，已经 识别和分离了许多与开花有关的基因，而这些基因如何在植物生长发育过程中进行特 定时空的表达及调控是植物生长转变研究的热点。近期的研究结果表明，DNA去甲 基化在植物基因表达调控中发挥了重要作用，有关DNA甲基化与植物春化作用的关 系目前主要集中于模式植物拟南芥，近年来在小麦、白菜等植物上也有报道，但有关 植物启动花芽分化后，DNA甲基化水平的变化亦未见报道。另外，春化信号为什么 不能传递给有性后代(即有性后代必须重新启动春化)也一直令人费解。本试验以冬 性强弱不同的萝h品种为材料，研究了萌动种子低温处理和5-azaC处理对花芽分化 和开花的影响，分析测定了花芽分化过程中茎尖组织和叶片碳水化合物、可溶性蛋白 质以及a．淀粉酶、EST和POD同工酶的活性和酶带变化，测定了低温处理和5-azaC 处理后茎尖组织DNA甲基化水平以及花芽分化前后茎尖组织和叶片DNA甲基化水 平的变化。主要实验结果如下： (1)在自然条件下，萝p从播种到现蕾、抽薹和开花的时间随品种、播种期而 发生变化，并存在极显著的品种与播种期的互作效应。强冬性的‘白玉春’和‘早春 大根’除了4月以前播种外，均不能在年内开花，而春性品种‘短叶13’即使在温 度较高、日照较短的早秋播种也能在年内开花。播种到开花的时间越短，开花时植株 的生长量(株高和叶片数)越少。 (2)萌动种子低温处理可以显著促进冬性品种‘一点红’和春性品种‘短叶13’ 的花芽分化。处理温度越低和，和处理时间越长，对花芽分化和开花的促进作用越明 显；春性品种‘短叶13’的萌动种子在5C和10。C条件下处理10d就能显著促进其 花芽分化，而且即使未经低温处理，并给予15。C以上的生长温度和16h的长日照条 件，植株也能在播种后70d内开花；但冬性品种‘一点红’则需要在5。C或10。C下处 理20d以上方能显著促进花芽分化，若不给予低温处理，即使给予16h的长光照条件， 在播种后90d也不能开花。低温处理在显著促进植株花芽分化的同时，减少了花芽分 化开始时的叶片数，株高也明显下降。 (3)无论是冬性品种‘一点红’或是春性品种‘短叶13’，在花芽分化过程中， 摘要茎尖可溶性糖、蔗糖和淀粉含量均发生了较有规律性的变化，品种间具有大致一致的 摘要 茎尖可溶性糖、蔗糖和淀粉含量均发生了较有规律性的变化，品种间具有大致一致的 变化趋势。随着花芽分化的继续，可溶性糖含量呈先上升后下降的趋势；蔗糖和淀粉 含量则一直呈现上升趋势，在花芽分化完成后再下降。叶片中可溶性糖、蔗糖和淀粉 含量始终低于茎尖。冬性品种‘一点红’在花芽分化初期的可溶性糖含量高于春性品 种‘短叶13’，但蔗糖和淀粉含量在整个花芽分化期间则始终较低。说明茎尖碳水化 合物，特别是蔗糖含量与花芽分化和品种冬性强弱有一定关系。 (4)花芽分化开始时，冬性品种‘一点红’其茎尖可溶性蛋白质含量明显低于 春性品种‘短叶13’，但此时叶片中蛋白质的含量则相反。在花芽分化前后，茎尖POD、 EST及a一淀粉酶活性有一定的变化，而且品种间具有相似的变化态势。但花芽分化 开始时以及花芽分化中期存在若干特异酶带，Rf=O．44和Rf=O．93的a-淀粉酶酶带 均没有在萌动种子中出现，但分别发生在花芽分化开始时的春性品种‘短叶13’和 冬性品种‘一点红’的茎尖和叶片中，该两条。一淀粉酶酶带可能与花芽分化和冬性 品种的强弱有关：Rf=O．15的EST酶带没有在萌动种子中出现，只有在花芽分化开 始的茎尖和叶片以及花芽分化中期的茎尖中存在，之后不再出现，所以可能与花芽分 化的启动有关。 (5)萌动种子低温处理可以明显降低茎尖组织DNA甲基化水平，而且随着处 理温度的降低和／或处理时间的延长，DNA甲基化水平呈继续下降的趋势。萌动种子 低温处理降低DNA甲基化水平的效果在品种间存在一定差异，春性品种‘短叶13’ 其DNA甲基化水平比较容易被降低，而冬性品种‘一点红’的萌动种子在IO。C下处 理lOcl尚不能降低其DNA甲基化水平。茎尖组织DNA甲基化水平因萌动种子低温 处理而降低的变化趋势与萌动种子低温处理对花芽分化和开花的促进作用具有一致 性。 (6)0．10～1．00ITImol／l的5-azaC处理萝h种子3～6d可以促进花芽分化和开花， 这种促进效果在春性品种‘短叶13’中更加明显。用5-azaC处理‘短叶13’萝h种 子6d，茎尖组织DNA甲基化水平均有所降低，并