氯化锂对钛表面成骨细胞成骨分化的影响-口腔临床医学专业毕业论文.docxVIP

温州医科大学硕士学位论文目录 温州医科大学硕士学位论文 目录 缩略词袁 ．．1 摘要 1．中文摘要 ． ．．2 2．英文摘要 ．． ．5 论文正文 1．前言 ．8 2．氯化锂对钛片表面成骨细胞成骨分化的影响 材料与方法 1 1 结果 ．．21 讨论 27 结论 30 3．参考文献 31 附录 ． 34 致谢 ．35 综述及参考献 ．36 独创性声明 ．43 万方数据 温州医科大学硕士学位论文缩略词 温州医科大学硕士学位论文 缩略词 缩略词 英文全称 中文全称 洳MEM Alpha modified minimal essential a-MEM培养基 medium FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 心已 Alkaline phosphatase 碱性磷酸酶 Runx2 Runt related transcription factor 2 核心结合因子 COL．I Type I collagen I型胶原 OC Osteocalcin 骨钙素 OD Optical density 光密度 ELISA Enzyme—linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附实验 Real．Time PCR Real-time fluorescence quantitative 实时荧光定量多聚酶 Polymerase chain reaction 链式反应 Ti Titanium 钛片 CDNA Complementa巧DNA 互补脱氧核糖核酸 mRNA Messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸 GAPDH Giyceraldhye—-3--phosphate 3．磷酸甘油醛脱氢酶 Dehydrogenase PAGE Polyacrylanmide gel electrophoresis 聚丙烯胺凝胶电泳 CCK8 Cell counting kit CCK8试剂盒 Licl I，ithium chloride 氯化锂 万方数据 温州医科大学硕士学位论文氯化锂对钛表面成骨细胞成骨分化的影响 温州医科大学硕士学位论文 氯化锂对钛表面成骨细胞成骨分化的影响 中文摘要 目的： 锂盐是一种人体非必须的微量元素。锂盐可独立影响骨代谢，并增加 骨密度，降低骨折风险。有研究表明，氯化锂可促进骨髓间充质干细胞和 牙周膜干细胞等干细胞的成骨作用。并且，也有动物实验表明氯化锂作用 于骨折模型小鼠和腭中缝扩大后的大鼠，其新骨形成都有所增加。然而， 氯化锂是否能促进成骨细胞成骨分化还存在争议。目前，国内外对氯化锂 在钛片表面复合培养成骨细胞后其生长情况、分化成骨及其作用机制的研 究报道比较少见。 本研究探索不同时间点不同浓度氯化锂对钛片上成骨细胞增殖和成 骨分化的影响，为进一步的动物实验及临床实验提供基础。 方法： 1． 将实验所用钛片进行粗化处理，再将成骨细胞接种于钛片上，进行体 外复合培养。将实验分成5个组，实验组4个即氯化锂组(2．5 mmol／L、 5 mmol／L、i0 mmol／L、20mmol／L)和空白组对照组(未加氯化锂组)。 2． 将MC3T3一El成骨细胞接种在钛片上培养，分别用含不同浓度氯化锂的 培养基进行培养。用CCK8法检测各组在第1天至第4天各时间点在 450nm波长时的吸光度值，评价不同浓度氯化锂对MC3T3一E1细胞增殖 的影响。结果进行统计分析。 3． 将MC3T3-EI成骨细胞接种在钛片上培养，分别用含不同浓度氯化锂 的培养基进行培养。采用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定各组细胞在 第4天和第8天时ALP的活性，评价不同浓度氯化锂对MC3T3一El细 胞成骨分化的影响。 4． 将MC3T3-EI成骨细胞接种在钛片上培养，分别用含不同浓度氯化锂 的培养基进行培养。采用ELISA OC试剂盒检测第6天和第12天各组 oC的分泌表达，评价不同浓度氯化锂对MC3T3-EI细胞成骨分化的影 响。 5． 将MC3T3-EI成骨细胞接种在钛片上培养，分别用含不同浓度氯化锂 的培养基进行培养。采用实时荧光定量PCR法，检测第6天各组成骨 细胞OC mRNA、Runx2mRNA和COL-I mRNA的基因表达，评价不同浓度 氯化锂对MC3T3-EI细胞成骨分化的影响。 2 万方数据 温州医科大学硕士学位论文6． 温州医科大学硕士学位论文 6． 将MC3T3一E1成骨细胞接种在钛片上培养，分别用含不同浓度氯化锂的 培养基进行培养。采用Western—blot法观察各组Runx2和COL—I蛋 白条带。评价不同浓度氯化锂对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响，评价 各个蛋白条带变化。 结果： 1．成骨细胞M