毛囊细胞间相互作用的研究-皮肤性病学专业毕业论文.docx

毛囊细胞问相互作用的研究摘 毛囊细胞问相互作用的研究 摘 要 | ／毛乳头(dermal papilla)位于毛囊底部的毛球中，周围包绕着毛母质细 胞，主要由毛乳头细胞(dermal papilla cells)组成。毛乳头细胞是特异化的 间质细胞，它在毛囊发育期能诱导毛囊形成，同时在毛囊生长维持及周期 性调节中起着中心作用。由于毛乳头的空间位置，给毛乳头的分离培养带 来了一定困难，为了寻求一种简单的毛乳头细胞分离培养方法，我们采用 二步酶消化法分离毛乳头，缩短了分离时间，降低了工作强度，同时还提 高了收获率。我们还观察了毛乳头细胞的生长情况、a平滑肌肌动蛋白的 表达及无血清培养。 毛乳头细胞是构成毛乳头的主要间质细胞，含有a．平滑肌肌动蛋白， 毛乳头细胞在毛囊周期中不但起着重要的调节作用，而且还有维持和诱导 作用。有研究表明毛乳头的结构和成分随毛囊周期而变化，毛球部的毛母 质细胞对毛乳头具有激活作用，激活后的毛乳头体积增大，结构松散。说 明毛囊在生长发育过程中存在着一系列的上皮细胞与间质细胞间的相互作 用。并且在毛囊周期中存在各种生长因子、粘附分子、多糖等物质的消涨 变化，但他们在毛囊周期中的作用尚不清楚。为了探讨人毛乳头细胞和毛 发上皮细胞间的相互作用，了解毛发生长周期的调控，寻找体内外毛囊重 建的途径，我们将毛发上皮细胞与毛乳头细胞分室和共同培养于DMEM培 养基中，在不同时相计数两种细胞，并观察了细胞的生长方式。 动物的毛囊是皮肤的一个复杂的附属器官，成熟毛囊的形成过程至少 涉及到上皮及真皮来源的20余种不同的细胞群，这些细胞间复杂的相互 作用以及细胞外基质的影响，都会改变细胞的功能特性及细胞表面分子介 导的细胞信号传递。毛乳头细胞是毛囊生长调控的中心细胞，它能够调节 毛囊定向分化与生长。毛囊细胞移植研究表明，只有毛乳头细胞才能诱导 VfII 毛胚芽或毛囊上皮细胞在体内形成毛囊结构，细胞在体内的相互作用是十 毛胚芽或毛囊上皮细胞在体内形成毛囊结构，细胞在体内的相互作用是十 分复杂的，往往受到许多因素的影响。为了进一步研究毛囊细胞间的相互 作用，探讨毛囊间质细胞对毛囊上皮细胞分化的调节作用，研究毛囊上皮 细胞的分化特性，我们利用团块状的毛乳头细胞，游离分散的毛乳头细胞 或皮肤成纤维细胞制成间质细胞胶原凝胶，表面接种皮肤角质形成细胞或 毛囊上皮细胞，进行气一液界面培养，在体外建立了毛乳头细胞诱导毛囊上 皮细胞分化的立体模型。 成熟的毛囊是一个复杂的三维立体结构，从体表一直延伸到真皮深部 及皮下组织。毛囊中至少含有7种上皮成分，经过不同的分化过程，最终 产生成熟的毛发纤维。在毛囊胚胎发育过程中，上皮细胞和其下的真皮细 胞相互作用诱导毛囊形态发生，毛发的生长具有生长、退化、休止的周期 性过程。毛囊生长周期的信号控制目前还不清楚。为了探讨人头皮毛乳头 细胞和毛发上皮细胞在体内的相互作用，了解毛乳头细胞在体内诱导毛囊 形成和调控毛囊生长发育的能力，建立一个研究毛囊形成过程中细胞间相 互作用的良好模型，对阐明毛囊的发育和生长机制是十分重要的，也为毛 囊细胞移植奠定实验基础。我们将诱导形成的人头皮毛乳头细胞团和毛发 上皮细胞共同移植到无胸腺裸鼠体内在不同时相取材进行组织切片HE染 色、角蛋白免疫组织化学染色和透射电镜观察。 毛囊移植是毛囊康复的一种重要手段。特别是对于某些永久性脱发， 毛囊移植是必不可少的。目前所采用的移植方法大多为毛囊器官移植，该 方法是治疗脱发疾病的一种十分有效的手段。但供体毛囊是有限的，往往 满足不了大面积脱发的需求。人们试图利用细胞的增殖特性，寻找解决这 一问题的方法。有研究表明毛乳头细胞在免疫缺陷动物(裸鼠)体内可以 诱导上皮细胞形成完整的毛囊结构，并见毛发生长，这为细胞移植诱导毛 囊形成奠定了理论和实验基础。但在人体作异体细胞移植不可避免地存在 免疫排斥反应，活化的T细胞是移植排斥反应的关键细胞4有研究表明 CTLA4能够阻止T细胞的活化，诱导机体产生免疫耐受。，为探讨免疫耐 受基因(CTLA4Ig)在毛乳头细胞中的表达及毛乳头细胞移植后产生免疫 TX 耐受，我们应用分子生物学技术，通过构建的重组腺病毒载体将CTLA4Ig 耐受，我们应用分子生物学技术，通过构建的重组腺病毒载体将CTLA4Ig 的cDNA导入培养的毛乳头细胞中，观察该基因在毛乳头细胞中的表达 情况，并将基因转染阳性的毛乳头细胞移植到小鼠体内，通过组织学和免 疫组化检测目的基因在体内和体外的表达及移植部位的炎症反应。 ，结果和结论： 1．我们用二步酶消化法分离得到高纯度的毛乳头，且培养的毛乳头细 胞呈典型的凝集性生长，a平滑肌肌动蛋白表达阳性，毛乳头细胞在 Williams E无血清培养基中生长良好。两步酶消化法是一种快速、简单、 经济