吸水链霉菌5008中谷氨酸脱氢酶SHJG7666的性质表征.pdfVIP

学 报 ３６０ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１８，４９（３）：３６０－３６８ 吸水链霉菌５００８中谷氨酸脱氢酶ＳＨＪＧ＿７６６６的性质表征 １ １ １ ２ １ 刘璋敏 ，巢佳佳 ，冯　雁 ，李　谦 ，崔　莉 １ （上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室，上海２００２４０； ２中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９） 摘　要　谷氨酸脱氢酶可在ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ辅因子协助下催化 酮戊二酸和谷氨酸之间的转化，是氮代谢途径的关键酶。基 α 于基因组ＢＬＡＳＴ分析预测，吸水链霉菌５００８（Ｓ５００８）中ＳＨＪＧ＿７６６６是谷氨酸脱氢酶的编码基因。本研究在大肠杆菌中对 ＳＨＪＧ＿７６６６蛋白进行了异源表达，并对其酶学性质进行了表征。系统发育树及同源建模结构分析显示ＳＨＪＧ＿７６６６具有保 ６０ ７８ １２０ 守的谷氨酸、酮戊二酸结合域以及经典的ＧＸＧＸＸＧ二核苷酸结合基序，其活性中心由Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ 催化功能位点及 α ３６ ３８ １１９ １６６ ３００ ３３０ Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ ，Ａｓｐ ，Ａｓｎ ，Ａｌａ 谷氨酸、酮戊二酸结合位点组成，属于Ｇｌｕ／Ｌｅｕ／Ｐｈｅ／Ｖａｌ脱氢酶家族；体外生化实验 α 显示，其催化 酮戊二酸转化为谷氨酸的最适ｐＨ和温度分别为７５和３７℃，对底物 酮戊二酸Ｋ 为（２５３±９１）ｍｏｌ／Ｌ， α α ｍ μ －５ －１ ｋ 为（３±０８）×１０ ｓ 。本研究验证了ＳＨＪＧ＿７６６６谷氨酸脱氢酶的催化功能，揭示了其活性中心关键氨基酸残基，为利 ｃａｔ 用蛋白质工程手段对ＳＨＪＧ＿７６６６进行分子设计以提高其催化活力，进一步利用代谢工程手段对宿主氮代谢进行调控奠定 了基础。 关键词　谷氨酸脱氢酶；氮代谢；井冈霉素；同源建模；酶学性质表征 中图分类号　Ｑ８１４　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１８）０３－０３６０－０９ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ 引用本文　刘璋敏，巢佳佳，冯雁，等吸水链霉菌５００８中谷氨酸脱氢酶ＳＨＪＧ＿７６６６的性质表征［Ｊ］．中国药科大学学报，２０１８，４９（３）： ３６０－３６８ Ｃｉｔｅｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｓ：ＬＩＵＺｈａｎｇｍｉｎ，ＣＨＡＯＪｉａｊｉａ，ＦＥＮＧＹａｎ，ｅｔａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｔａｍａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＳＨＪＧ＿７６６６ｆｒｏｍＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ５００８［Ｊ］．ＪＣｈｉｎａＰｈａｒｍＵｎｉｖ，２０１８，４９（３）：３６０－３６８ ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｔａｍａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＳＨＪＧ＿７６６６ｆｒｏｍＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ５００８ １ １ １ ２ １ ＬＩＵＺｈａｎｇｍｉｎ牞ＣＨＡＯＪｉａｊｉａ牞ＦＥＮＧＹａｎ牞ＬＩＱｉａｎ 牞ＣＵＩＬｉ １ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｃｒｏｂｉａｌＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ牞ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞Ｓｈａ