裸鼠高致瘤性人白血病细胞系的生物学特性研究-内科学(血液病)专业毕业论文.docx

摘要目的和意义通过对K562和HL．60细胞系衍生的裸鼠高致瘤性人白血病细 摘要 目的和意义通过对K562和HL．60细胞系衍生的裸鼠高致瘤性人白血病细 胞系K562．n和HL60．11不同克隆株生物学特性的观察研究，探索人白血病细胞 在裸鼠体内致瘤的细胞生物学机理及白血病与裸鼠致瘤性有关的特异性染色体 核型变化，并初步探索与K562．n细胞致瘤性相关的基因表达变化，为进一步深 入研究白血病发生、发展的分子生物学机理打下基础。 ， 一一 ／方法通过裸鼠体内接种与体外培养相结合的方法，分别自K562和H／．,-60 、 细胞系建立高致瘤性的人白血病细胞系K562．rl和HL60．n，应用极限稀释法分别 建立K562．n、HL60-n细胞系的不同克隆株，并以K562、HL．60细胞为对照，比 较K562．n、HI_,60．13细胞不同克隆株在裸鼠致瘤性、软琼脂培养集落形成率、 电镜超微结构、流式细胞仪细胞周期分布、对裸鼠NK细胞杀伤的耐受性、裸鼠 体内所致肿瘤病理等方面的差异。并对致瘤性不同的各个细胞株进行染色体核型 分析，观察与致瘤性相关的染色体变化。在此基础上，应用DNA芯片技术对 K562和K562．n细胞进行基因表达谱差异研究，分析与K562．n细胞裸鼠高致瘤 性相关的基因表达变化。 结果所建立的高致瘤性K562．B、K562．C、K5620E、HL60．A、HL60．B克 隆株，其软琼脂培养集落形成率，较K562、HL-60细胞显著增高。电镜细胞超 微结构提示高致瘤性细胞株相对其母细胞，常染色质增多，异染色质少见，胞浆 量少，可见线粒体等细胞器聚集成堆，胞浆内微丝增多且排列紊乱；流式细胞仪 细胞周期分析提示高致瘤性的细胞株，S期细胞比例较高，提示高致瘤性的克隆 株细胞增殖和DNA合成活跃。实验结果还表明裸鼠NK细胞对K562．n和HL60．n 细胞高致瘤性克隆株的杀伤活性显著降低，证实人白血病细胞系在裸鼠体内的致 瘤性与其对NK细胞的敏感性呈负相关。对裸鼠肿瘤的病理观察显示低致瘤性的 白血病细胞在裸鼠所致的肿瘤组织内有大量的淋巴细胞等炎性细胞浸润，可见大 量肿瘤细胞死亡，血供丰富区尤甚；而高致瘤性克隆株所致肿瘤组织内炎性细胞 浸润少，仅在瘤组织中央血供不足处有缺血性坏死，表明接种高致瘤性白血病细 胞株可使宿主的免疫力受到抑制。染色体核型分析结果表明，K562细胞染色体 数目为44．71，干系为亚三倍体，染色体众数(62±2，占52％)。高致瘤性的 K562-n细胞干系为近二倍体，分析比较K562、K562-n细胞及K562．n细胞衍生 摘要的K562-A克隆株的染色体核型，发现K562．n细胞的致瘤性主要与1、2、16、 摘要 的K562-A克隆株的染色体核型，发现K562．n细胞的致瘤性主要与1、2、16、 18、20、21、11及12号等染色体的变化有关。HL-60细胞系的染色体数目为38．71， 干系为近二倍体，从高致瘤性的HL60．rl细胞系衍生的各克隆株都为近三倍体， 比较分析致瘤性不同的细胞株的染色体核型，发现Mar3、19、21、22和5号 等染色体的变化与HL60．n细胞的致瘤性相关。用含有12800个基因的eDNA芯 片对K562．n和K562细胞系进行基因表达差异分析。结果发现K562-n和K562 细胞差异表达的基因有139条，其中K562．n细胞表达上调的有42条，表达下调 的有97条。在这139条基因中，有85条已在GeneBank中登录，54条为新序列。 这些在K562．n细胞中表达变化的基因可以划分为不同的功能群。上调的基因包 括原癌基因、转录调节相关的基因、与细胞骨架、细胞动力学相关的基因及编码 细胞代谢酶和物质转运蛋白的基因。下调的基因包括潜在的肿瘤抑制基因、调控 凋亡、细胞周期和信号传导的基因、某些代谢相关的基因及与免疫功能相关的基 因。 结论：与K562和HL．60细胞相比，裸鼠高致瘤性的K562．11、HL60-n细胞 的细胞生物学行为表现为：软琼脂培养集落形成率增高；S期细胞比例增多；常 染色质增多、异染色质减少、微丝增多等超微结构改变；对裸鼠NK细胞杀伤的 耐受性增强；所致裸鼠肿瘤组织内炎性细胞浸润减少。细胞染色体核型分析示 K562-n细胞干系核型由K562细胞干系的亚三倍体转变为近二倍体，1、2、16、 18、20、21、1l、12等染色体的改变与K562．n细胞系的裸鼠致瘤性升高有关。 而高致瘤性的I-IL60．n细胞系各克隆株由HL．60细胞的近二体核型转变为近三倍 体，Mar3、 19、21、22、5号等染色体变化与HL60-n细胞的致瘤性相关。对 K562-n和K562细胞的DNA芯片基因表达差异研究表明K562-n细胞的致瘤性 增高涉及多基因的表达变化，包括一系列