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抗体的检测实验的实验报告 　　实验名称:乙肝五项检查　　实验目的:判断是否感染乙肝，并粗略估计病毒复制水平的初步检查。实验检查各项意义和检测原理:　　?HBsAg-乙肝病毒表面抗原：为已感染病毒的标志，并不反映病毒有无复制，复制程度，传染性强弱。采用双抗体夹心法检测HBsAg。　　?HBsAb-乙肝病毒表面抗体：为中和性抗体标志，是否康复或是否有抵抗力的主要标志。采用EIA双抗原夹心法检测人血清或血浆中的抗-HBs。?HBeAg-乙肝病毒e抗原：为病毒复制标志。持续阳性3个月以上则有慢性化倾向。采用双抗体夹心法检测HBeAg。　　?HBeAb-乙肝病毒e抗体：为病毒复制停止标志，病毒复减少，传染性较弱，但并非完全没有传染性。采用中和竞争法检测抗-HBe。　　?HBcAb-乙肝病毒核心抗体：为曾感染或正在感染者都会出现的标志。采用竞争抑制法检测抗-HBc。　　操作步骤　　1，实验准备：正常采血技术收集血液，全血样品在3000转/分钟下离心6分钟以上，待用；从冷藏环境中取出试剂盒，室温下平衡30min。　　2，加待测标本：将加样板分为5组，在第一组即表面抗原组加入待测标本100μL，第二三四五组即表面抗体组，e抗原组，e抗体组以及核心抗体组各加入待测样本50μL，第二三四五组中分别加入对应酶50μL(1滴)，且第四组还需要加入对应中和物50μL(1滴)，将五组放入37℃孵育箱。第一组孵育1h，其余四组孵育30min。　　3，取出后四组，洗板：弃去反应板条孔内多余液体，洗涤液注满每孔，静止5-10秒，弃去孔内洗涤液，如此反复5-6次，在吸水纸上拍干。各孔分别先后加入显色剂A液与B液，各50μL(1滴)，置于孵育箱15min。4，取出后四组，观察并记录结果。　　5，取出第一组，各孔加入对应酶5050μL(1滴)，置于孵育箱30min。　　6，取出第一组，洗板，同上。各孔分别先后加入显色剂A液与B液，各50μL(1滴)，置于孵育箱30min。　　7，取出第一组，与后四组，对比观察结果。　　注意事项　　1，本品仅用于体外诊断，仅限于检测人体血清、血浆。　　2，此实验应在通风室内进行，并戴好手套和口罩。　　3，试剂盒需在室温中平衡30min。　　4，必须确保样品加样量的准确。　　5，加样过程中应尽量避免反应微孔中产生气泡。　　6，使用微量加样枪手工加样时每次应更换枪头。　　7，加完酶结合物和显色剂A、B后要进行摇匀。　　8，准确记孵育时间。　　9，洗板应谨慎，尽量避免样品被(来自:写论文网:抗体的检测实验的实验报告)污染。　　10，如果有任何试剂接触皮肤或眼睛，必须马上用大量清水对接触部位进行扩大清洗和消毒。常见检查结果　　?－－－－－：未感染过；　　?－＋－－－：康复期、主动免疫后；　　????????＋－＋－－：急性乙肝早期，传染性强；＋－＋－＋，俗称“大三阳”：急慢性乙肝，病毒复制活跃，传染性强；＋－－－＋：急慢性乙型肝炎、慢性HBsAg携带者；＋－－＋＋，俗称“小三阳”：急慢性乙肝，传染性较弱；－－－－＋：乙肝病毒携带者或处于感染窗口期，说明曾感染过乙肝病毒；－－－＋＋：说明急性乙肝病毒感染的恢复期或曾感染过乙肝，传染性弱；－＋－＋＋：乙肝的恢复期，已有免疫力；－＋－－＋：说明接种了乙肝疫苗后，或是一个病毒感染后已康复，已有免疫力。　　实验一抗体的制备及效价检测　　一、实验目的　　本实验是单克隆抗体技术的免疫阶段的过程，为单克隆抗体技术提供免疫淋巴细胞。了解免疫的原理，掌握免疫方法和抗血清的制备技术，掌握双向免疫扩散法测定抗体的效价。　　二、实验原理　　机体的特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产生体液免疫和细胞免疫的过程。一种抗原能否引发抗体反应，一方面取决于抗原分子表面有无特异性的化学结构---抗原决定簇，另一方面取决于机体有无相应的免疫活性细胞。当上述两个条件具备时，抗原进入机体经过一定的潜伏期，抗体效价逐步上升，达到高峰后，能维持一短暂的时期，以后又逐渐下降，但当第二次接触相同的抗原时，抗体的上升较前次为快，高峰时的效价也比前次为高。抗体持续的时间也较长，此也称为再次反应。　　完全福氏佐剂的使用能够延长抗原在体内的存留时间，增加可溶性抗原的免疫性。通常制备抗体时常用完全福氏佐剂加强免疫。　　抗原、抗体在合适的浓度和比例条件下，抗原和其相应的抗体在有固相支持的液相环境中各自发生扩散。分子双向扩散接触时形成肉眼可见的沉淀线反应。抗体的效价即时指与固定浓度的抗原发生沉淀反应时所需的最小抗体浓度。　　三、实验步骤　　1．动物的选择：选择2-3个月以上的小鼠。免疫作好标号。分笼饲养。　　2．抗原的选择：将抗原稀释为4mg/ml，即可与佐剂混合制成乳剂用于动物