美洲商陆抗病毒蛋白在细胞内转运途径的研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

Au Au‘hor，55，gnature:卫 泣 企 班 呀 户 S u P e rv iso r ，5 sig n a tu re T h e s is re v ie w e r l : T h e s is re v ie w e r Z : m e d ie a l S e h o o l T h e s iS fC V ie W C t 3 : C h a ir : M e d ie a l S e h o o l C o 们nr n itte e m an l : C o 们n 们以itte e m an Z : D at e o f o ra l d e fe flC e : J lllle s 2 0 0 8 J 2008 2008 浙 江 大 学 硕 士 学 位 论 文 致 谢 本 论 文是 在 导 师詹 金彪 教授 的悉心指 导和支持 下 完成 的 ! 这 两年 来 ， 导 师在 学 业 上 给 予 的谆 谆 教 诲 ，在 实验 方 面 给 予 的悉 心 指 导 ，在 生 活 上 关 怀 ····一 直 以来 的宽 容 ，理 解 和 鼓 励 ， 我 满 怀 感 激 ! 导 师严 谨 的 治学 态度 ，广 博 的学 识 ，对 科 学研 究孜 孜 不倦 的追 求 ，是 我 尊敬 的 ，学 习的榜 样 。 感 谢 生化 教研 室全体 老 师和 同学 的关心 和 支 持 ! 感 谢 浙 大 医 学 院 细 胞 生 物 所 李 继 承 老 师教 授 ， 生 理 教 研 室 B ru ce 教 授 在 论 文 写作 上 给 予 的指 导和建 议 。感 谢 杨 萍老 师在 电 镜 实验 上 的帮 助 。 感 谢 本 实验 室 的刘 波 ，邹 媛 ，黄 建 松 ，刘 洋 ，杨 乃 娣 ，余 晓 乐 ，张黎黎 等 师兄 师姐 师弟 师妹在 实验 和 生活上 的支持 、关心和 帮 助 。还 有 万 晓晨 ，沈培 ，刘 黎 明 ，王 志 勇 ，寝 室 的姐 妹 们 ，因 为 你 们 大家 ， 我 的研 究 生 生 活充 满 了美好 的 回忆 ! 最 后 ， 感 谢 我 的 亲 人 和 朋 友 们 ，你 们 无 私 关 怀 和 爱 护 一 直是 我努 力 坚持 的 动力 ! 真诚 的感谢 ，祝 福 ! 200 200 8 浙 江 大 学 硕 士 学 位 论 文 美 洲 商 陆抗 病 毒蛋 白在 细胞 内转运 途径研 究 浙 江 大 学 医学 院 生 物 化 学 与分 子 生物 学 专 业 2 006 级硕 士研 究 生 李 芳琼 导 师 詹 金彪 中文摘 要 美 洲 商 陆抗 病 毒 蛋 白 ( po ke w eed ant iviral protei n，PA P ) 是 一种 存 在 于 美 洲 商 陆护勺勿lac c。A m eric ana) 叶子 中的 I 型核 糖体 失 活蛋 白，有 多种 生物 学 功 能。与 n 型核 糖 体 失 活 蛋 白不 同 ， 它具 有 良好 的抗 肿瘤 和 抗 病 毒 活 性 ，特 别 是 它 能抑 制 H IV- 1 的 复 制 ，可 能有 临床 应用 前 景 ，因而受 到 了广 泛 关 注 。本 论 文 在 实验 室 已 有基 础 上成 功将 P 妙 基 因克 隆 至表 达 载体 pE T 一44 a (+) 并在 大肠 杆 菌 中表 达 ，利 用 非放 射性 E U SA 方 法 ，证 实 了 P A P 对 H IV- 1 整 合 酶有抑 制作用 ，ICS 。为 1.82 林创m l。 此外 ，结构 上 P A p 只具有 一条 活性 A 链 ， 目前 为止 国 内外对 不含 受体 链 B 链 的 I 型核 糖体 失 活蛋 白包 括 P A P ，在 哺乳 细胞 内细 胞 内的转运 途 径 研 究很 少 ，利 用 免 疫 电镜 胶体 金 实验 ，我们 发 现 P A p 在 H E P 一G Z 细胞 内转运 到达 了内 质 网和 细 胞 核 . P A P 能够 入 核 表 明 它很 可 能通 过 进 入 细 胞 核 内发 挥 切 割 病 毒 基 因组或 抑 制 H lv- 1 整合 酶 ，从 而达 到抑 制病 毒 复制 的 目的. 1. P A p 墓 因的表 达 ，纯化及 活性鉴定 利 用 本 实 验 室 构 建 的 pE T 一44 a (+)一P 妙 原 核 表 达 基 因 ， 将 质 粒 pE T 一44 a (+ )一p AP 用 C aC 12法 转 化进 入丑coliB L Z I(D E 3)中，经 lmM IPT G 诱 导表 达 得 klj pAP包 涵体 .包 涵体 经 过尿 素 变性 ，低 温透 析 复