马铃薯病毒和类病毒的分子诊断方法研究-微生物学专业毕业论文.docx

塑坚查兰堡主堂垡堡塞略语表 塑坚查兰堡主堂垡堡塞 略语表 RT-PCR 反转录一聚合酶链式反应 Reverse Iranscription-polymera∞chaill reaction ELISA 酶联免疫吸附 Enzyme-liked immunoabsorbent assay NASH 核酸斑点杂交 Nucleic acid spot hybridization GEB 普通提取缓冲液 General extraction buffer CB 包被缓冲液 Coating buffer VDA-RT-PCR 病毒粒子直接吸附-RT-PCR V矾on-direct absorbent-RT-PCR IC-RT-PCR 免疫捕捉-RT-PCR Immunocapture-RT-PCR 目录插图目录 目录 插图目录 图2-1．RT-PCR扩增多个病毒、PSTVd和18S rRNA部分核苷酸序列的电泳结果 25 图3一1．RT-PCR扩增四种病毒提取缓冲液获得的PVX病毒RNA的结果 34 图3．2．RT-PCR扩增不同孵育时间获得的病毒RNA的结果． 35 图3-3．RT-PCR扩增不同变性温度获得的病毒RNA的结果． 36 图3—4．VDA-RT-PCR和IC-RT-PCR二者检测PVX的最低极限． 36 图3．5．VDA-RT-PCR扩增PVX、PVY和PVS三者Y末端核苷酸序列的结果 37 图4．1．RT-PCR扩增had2 mRNA部分核苷酸序列的电泳结果． 图4-2．18S rRNA和had2mRNA作为内参照的灵敏度比较 。46 图4-3．18S rRNA,had2 mRNA和PVX三者在离体组织中的稳定性比较 。47 图4．4．用病毒和18S rRNA特异的引物从单个病毒侵染的叶组织混合样品中分别检测 5种病毒和18S rRNA ．48 图4-5．4种反应组分的浓度变化对多重RT-PCR反应效率的影响． 图4-6．3个热循环参数的变化对多重RT-PCR反应效率的影响 图4．7．多重RT-PCR检测病毒的不同组合 5l 图4-8．多重RT-PCR和DAS-ELISA二者检测极限的比较 ． 52 图5．1．杂交温度对各寡聚核苷酸探针杂交信号的影响 ． 63 图5-2．多重PCR分组扩增7种马铃薯病毒、PSTVd和18S rRNA的结果 ．64 图5—3．四亚组的多重标记PCR产物与寡聚核苷酸微点阵的杂交结果． 图5-4．寡聚核苷酸微点阵和RNA核酸斑点杂交检测CMV的灵敏度比较 66 图5—5．寡聚核苷酸微点阵检测4个CMV分离物 67 图6-1．不同点样缓冲液对RNA在氨基硅烷玻片表面结合效率的影响 75 图6-2．三种不同类型的玻片对RNA结合效率的影响． 76 图6-3．玻片杂交和尼龙膜杂交检测TMV的最低极限 ． 78 V UST UST FoR nGURES Figure 2-I．Electrophoresls results ofRT-PCR amplification for panial nucleotide sequences ofmultipleviruses,PSTVdandl8S rRNA．．． ．．．．．．． ．．． ．．． ． ． ．．．．．．．．．．． 25 Figure 3·1．Results of RT-PCR amplification for PVX RNA obtaine(1 using four different extraction buffers． ．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ． ．．．． ． ．．．．．．． ． ．． ． ．，．．．．．．．．．．34 Figure 3- 2．Results of RT-PCR amplification for PVX RNA obtained using different incubation pe村ods．．．．．．． ．．．． ．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．． ．． ．．．．． ．．．．．．．．．．·35 Figure 3· 3．Results of RT-PCR amplification for PVX RNA obtained using different denaturingmmperatures．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．36 Figure 3—