抗菌蛋白、硫堇蛋白等辣椒PR基因转化水稻及其抗稻瘟病初步分析-生物学;生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

‘，· ‘，· 植鼻 A. 、 ]独创性声明 ] 独创性声明 本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中己作 了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位(毕业)论文作者亲笔签名： 际华吼日期：训·¨6 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。 口 学位(毕业)论文储亲笔签名：肼岫 日期：加I『．“ 指导教师亲笔签名：饷哳捧 日期．卯ff．¨易 福建农林大学2。。。届硕士毕业论文目录 福建农林大学2。。。届硕士毕业论文 目录 摘要 I Abstract． III 1．文献综述 ．1 1．1植物的抗病分子机制 _ 。l 1．1．1过敏性反应(hypersensitive response，I-m) ．．2 1．1．2系统性获得抗性(systemic aquire resistances，SAR) 2 1．1．3植物先天性免疫系统 ．．2 1．2植物的抗病遗传基础模式 5 1．2．1基因对基因假说 ．5 1．2．2配体．受体模型 6 1．2．3防卫模式(guard hypothesis) ．．6 1．3植物的抗病基因(R基因) ．6 1．4植物防卫反应基因 7 1．4．1防卫反应基因的主要类型 。8 1．5抗病基因在水稻基因工程的应用 ．．10 1．5．1抗病基因的利用 10 1．5．2 PRs基因在水稻抗病中的应用 ．1 l 1．5．3诱导型表达启动子 13 1．6本实验的研究意义 ．．13 2．材料与方法 14 2．1材料 ．14 2．1．1菌株： 14 2．1．2载1本 ．14 2．1．3植物材料 。14 2．1．4工具酶及试剂 ．．14 2．2实验方法 。 。14 2．2．1 CaAPs等的诱导型植物表达载体的构建 14 2．2．2农杆菌介导的水稻遗传转化及植株再生 15 2．2．3转基因水稻的PCR检测 16 2．2．4转基因水稻的稻瘟病接种处理 ．．16 2．2．5 RT-PCR分析 l 6 2．2．6抗稻瘟病表型鉴定 17 3．结果与分析 ．1 8 3．1 Gateway技术构建植物表达载体 l 8 3．1．1 BP反应与LR反应 ．．1 8 3．1．2目的载体转化农杆菌EHA 105 20 3．2转基因阳性水稻植株的获得 ．21 3．2．1农杆菌介导的水稻遗传转化体系 。2 l 3．2．2转基因水稻阳性株系的分子鉴定 22 3．3转基因植株的抗稻瘟病检测 一23 3．3．1 To代转基因植株结实率和潮霉素筛选种子发芽率 23 3．3．2 RT-PCR分析 23 福建农林大学201 福建农林大学201 1届硕士毕业论文 3．3．3表型分析 25 4．讨论 27 4．1辣椒PRs基因在水稻中表达提高了水稻对稻瘟菌的抗性 一27 4．2外源PRs基因在转基因水稻的转化表达与抗病性的关系 ．．28 4．3诱导型启动子的开发 28 4．4展望 ．29 参考文献 ．30 附录l缩略词及英汉对照 37 附录2主要实验仪器和试剂 38 附录3所用试剂与缓冲液的配制 39 附录4本研究所采用的培养基配方 40 附录5水稻DNA提取及纯化 ．．42 附录6水稻RNA提取及纯化 ．．43 附录7质粒载体图谱 44 附录8 DNA Marker示意图 45 致谢 ．5 1 福建农林大学201 福建农林大学201 l届硕士毕业论文 摘要 水稻作为我国最主要的粮食作物之一，是我国粮食安全和农业可持续发展的 重要战略资源。长期以来，稻瘟病、纹枯病、白叶枯病等真菌性或者细菌性病害 严重限制了水稻的产量和品质。通过基因工程克隆抗病基因并与常规育种技术相 结合培育抗病新品种是现代作物遗传改良的有效途径。本研究拟从辣椒中分离出 的广谱抗病基因(抗菌蛋白、硫素蛋白、亲环蛋白、铁氧还蛋白、非特异性脂转 移蛋白)与强诱导型启动子LURPl(Late Upregulated in Response to Hyaloperonospora parasitica)结合起来转化水稻日本晴，获得转基因植株，并进 行稻瘟病的初步抗性分析，从中筛选具有较强抗稻瘟病的转基因新品种，为实现 水稻抗病与高产的有机统一打下一定的基础。主要