盐酸克伦特罗抗体纯化及直接竞争ELISA方法研究-食品科学.PDFVIP

※分析检测 食品科学 2013, Vol.34, No.14 227 盐酸克伦特罗抗体纯化及直接竞争 ELISA方法研究 1 2 2 2 2 袁利鹏 ，卢倚群，孙远明，徐振林，雷红涛 (1.广东农工商职业技术学院热作系，广东 广州  510640 ； 2.广东省食品质量安全重点实验室，农业部农产品贮藏质量安全风险评价重点实验室，广东 广州  510642) 摘  要：对比饱和硫酸铵法、辛酸法、辛酸-硫酸铵法和硫酸铵-DEAE-纤维素法4种纯化方法对盐酸克伦特罗抗体的 纯化效果，研究简易过碘酸钠法与3种改良过碘酸钠法对抗体-辣根过氧化物酶标记率的影响，基于酶标记抗体建立快 速检测盐酸克伦特罗的直接竞争酶联免疫分析(ELISA)方法。结果表明：辛酸法纯化抗体得率最高，但纯度最差；辛 酸-硫酸铵和硫酸铵-DEAE-纤维素法纯化抗体得率较低，但纯度最好。简易过碘酸钠法所获得的抗体-酶标记得率最 高，但抗体效价偏低，改良过碘酸钠法获得的抗体效价明显升高。直接竞争ELISA方法检测盐酸克伦特罗的最低检测 限为2.7ng/mL，尿样加标回收率94.2%，批内变异系数为9.1%，批间变异系数为13.8%，与其他结构类似物无明显交叉 反应。该方法具有操作简便、步骤少、灵敏度高、特异性更好等特点，可进一步在克伦特罗的监测中发挥重要作用。 关键词：克伦特罗；纯化；酶标记；ELISA Purification of Anti-Clenbuterol Antibody and Development of Direct Competitive ELISA 1 2 2 2 2 YUAN Li-peng ，LU Qi-qun ，SUN Yuan-ming ，XU Zhen-lin ，LEI Hong-tao (1. Department of Tropical Crops, Guangdong AIB Polytechnic College, Guangzhou 510640, China ； 2. Key Risk Assessment Laboratory of Agricultural Product Preservation, Ministry of Agriculture, Guangdong Provincial Key Laboratory of Food Quality and Safty, Guangzhou 510642, China) Abstract - ：Four methods, including saturated ammonium sulfate (SAS), caprylic acid (CA), caprylic acid ammonium sulfate - - (CA AS) and ammonium sulfate-DEAE-cellulose (SAS DEAE) were compared for their effectiveness in the purification of anti-clenbuterol antibodies. Meanwhile, the eff