粘质沙雷氏菌低温脂肪酶的基因克隆与酶学性质分析.pdf

第 卷 第 期 福州大学学报 自然科学版 年 月 文章编号 粘质沙雷氏菌低温脂肪酶的基因克隆与酶学性质分析 李婧秏 李仁宽 林 娟 叶秀云 福州大学生物科学与工程学院 福建 福州 酶高效表达国家工程实验室 福建 福州 摘要 克隆一个源于北极冻土沙雷氏菌的脂肪酶基因 实现其在大肠杆菌中的表达 并进行酶学性质研 究克隆脂肪酶基因 并构建 重组表达载体 导入大肠杆菌 中 诱导优 化重组蛋白表达 并研究其酶学性质克隆得到脂肪酶基因 全长为 编码 个氨基酸重组菌 的诱导温度对蛋白表达影响很大 在最适诱导温度为 时脂肪酶大量表达 重组脂肪酶的相对分子质量约 为 酶学性质研究表明 重组酶高效水解 的中 长链脂肪酸 最适作用温度 最适作用 值 并且在 条件下有一定的催化活性 热稳定性差 是低温中性脂肪酶 同时 对有机溶剂有较好的 耐受性 关键词 沙雷氏菌 脂肪酶 克隆 表达 性质分析 中图分类号 文献标识码 引言 脂肪酶 是在异相系统油水界面催化天然油脂的酯键水解产生丙三醇和水 不溶性十二碳以上长链脂肪酸的一类酶的总称 不同于大多数水解酶 脂肪酶的催化反应体系为非均 相系统鉴于脂肪酶的特性 其在传统工业领域如食品 医药 洗涤剂 皮革和造纸等具有重要用途 同时在新型工业领域如生物柴油 手性化合物和功能性低聚糖制备等也具有宽阔的应用前景 目前研究最多的产脂肪酶的细菌是芽孢杆菌 芽孢杆菌属的脂肪酶具有较好的耐热性和耐碱 性粘质沙雷氏菌 亦称灵杆菌 有对底物的催化反应存在底物异构 收稿日期 通讯作者 叶秀云 教授 主要从事蛋白质工程方面的研究 基金项目 国家海洋局海洋公益性行业科研专项资助项目 第 期 李婧秏 等 粘质沙雷氏菌低温脂肪酶的基因克隆与酶学性质分析 性和有机溶剂耐受性 在手性药物的动力学拆分和生物柴油等领域的作用不可估量 但其有条件致病性 以及产鲜红色素 故通过对其进行异源表达的研究不断增多 以期提高 脂肪酶的性质 等 报道了 的脂肪酶基因在大肠杆菌表达体系中表达 可用于外消旋体氟比洛芬 酯的动力学拆分 其对光学纯的 氟比洛芬 的选择性较高 朱绮霞等 将粘质 沙雷氏菌脂肪酶基因插入重组表达载体 导入大肠杆菌 中实现脂肪酶