点带石斑鱼幽门垂胰蛋白酶的纯化与特性分析.DOC

點帶石斑魚幽門垂胰蛋白酶的純化與特性分析 Purification and characterization of trypsin from the pyloric caeca of orange-spotted grouper, Epinephelus coioides 研究生：徐雅麗 Shiu, Yali 指導教授：劉俊宏 Liu, Chun-Hung 【摘要】 胰蛋白酶在消化過程中扮演重要角色，主要存在於幽門垂和小腸。其除了參與蛋白質消化外，更與消化道中其他酶原 (如：胰凝乳蛋白酶原和彈性蛋白酶原)的活化作用有關。因此，胰蛋白酶的活性常被做為魚類早期發育時，消化系統分化的指標。 研究目的為藉由硫酸銨沉澱 (飽和濃度 40-60%)、陰離子交換樹脂管柱層析和benzamidine sepharose管柱，純化點帶石斑魚幽門垂的胰蛋白酶。純化後的胰蛋白酶在SDS上顯示為單一蛋白質條帶，分子量為24kDa、純度161.85倍，回收率為4%。以Να-benzoyl-L-arginine ethyl ester作為基質，胰蛋白酶在pH 8和50℃具有最高活性；溫度20-50℃和 pH 6.0-8.0時，胰蛋白酶活性呈現穩定；NaCl (0-0.6 M)濃度增加會造成胰蛋白酶活性下降。大豆胰蛋白酶抑制劑和N-ρ-tosyl-L-lysine-chloromethyl ketone對純化